دليل العمل في مختبر األحياء

Transkript

1 المملكة العربية السعودية وزارة التربية والتعليم )280( اإلدارة العامة للبنات بمنطقة الرياض إدارة التجهيزات المدرسية وتقنيات التعليم مركز التقنيات التربوية دليل العمل في مختبر األحياء عام 2344/2341 ه

2 بنت مقبل فاطمة الخلف بنت رميح نورة الرميح مشرفة مختبرات مدرسية مشرفة مختبرات مدرسية مكتب التربية والتعليم/ جنوب الرياض مكتب التربية والتعليم/ وسط الرياض بدرية بنت عبد العزيز القضيبي رئيسة قسم المختبرات المدرسية مركز التقنيات التربوية عام 2344/2341 ه 1

3 املقدمة بسم هللا الرحمن الرحيم وحدة والحمد هلل الذي علم اإلنسان مالم يعلم, والصالة والسالم على من ال نبي بعده محمد وعلى آله وصحبه أجمعين وبعد,, ال تقتصر دورة التعلم على مجرد االهتمام بمحتوى المادة العلمية وإنما تعداها لتصل إلى التركيز على الجانب العلمي والطريقة التي يتعلم بها الطالب وهي إطار يشتمل على مجموعة من الممارسات التعليمية,والتعليمية التربوية الجيدة مثل ممارسة عملية التعلم,األنشطة, االستقصاء,العمل الفردي,العمل التعاوني, التقويم بكل أشكاله...الخ وحيث أن التلميذ يعتبر المحور األساسي في العملية التعليمية والتربوية والمعلم يقوم بدور المرشد والمشرف عامة, ومعلم العلوم خاصة يقوم بذلك بالتكامل مع محضر المختبر, من هذا المنطلق دعت حاجتهما لمراجع علمية وأدلة للعمل في مختبرات العلوم عامة, ومنها مختبر األحياء, لذلك تم إعداد هذا الدليل ليكون بمثابة المرجع العلمي لهما للعمل في مختبر األحياء بحيث يخدم جميع المراحل التعليمية. ودليل العمل في مختبر األحياء هذا تم إعداده بحيث يحتوي على أربعة فصول, تناول األول منها إرشادات السالمة واالحتياطات في مختبر األحياء, أما الفصل الثاني فتناول تجهيزات مختبر األحياء وتصنيفها للمرحلتين األساسيتين والثانوية مدعمة بالصور,فضال عن كيفية استخدامها وحفظها, أما الفصل الثالث فتناول بعض األجهزة التي تستخدم بكثرة في المختبر وأخيرا جاء الفصل الرابع متناوالا أهم المهارات األساسية والضرورية التي ينبغي على معلم العلوم ومحضر المختبر أن يتقنها في مختبر األحياء. وأخيرا نأمل أن نكون قد وفقنا في طرح الموضوعات بحيث يخدم الهدف الذي من أجله تم إعداد مادة هذا الدليل. نقدم وختاماا شكرنا وتقديرنا لكل من ساهم في إنجاح هذا الجهد المتواضع والذي نتمنى من هللا العلي القدير أن يكون فيه النفع والفائدة للجميع من معلمين ومحضرين وتالميذ في جميع أقطار الدول العربية. فريق اإلعداد 2

4 الفصل األول إرشادات األمن والسالمة يف خمترب األحياء 3

5 ال إرشادات السالمة يف خمترب األحياء أوال : إرشادات عامة 7 1 استخدم القفازات البالستيكية والكمامات ومعطف المختبر سواء عند تشريح العينات أو دراستها. 2 يجب أن تكون التهويةكافية داخل المختبر أثناء دراسة العينات المحفوظة. 3 اغسل اليدين بالماء والصابون أو الكحول بعد االنتهاء من دراسة العينات أو تشريحها. 4 أعد األدوات إلى مكانها المخصص بعد االنتهاء من استخدامها وتنظيفها. 5 ا حفظ األدوات بعيدا عن الرطوبة وخاصة المعدنية منها منعا من الصدأ. 6 تجنب األكل والشرب داخل مختبر األحياء. تستخدم ثالجة المختبر لحفظ المواد الغذائية. 8 عدم استخدام الفم أو لمس العينين أثناء العمل داخل المختبر. 9 ضرورة تدوين المعلومات على األطباق واألنابيب بطريقه مثالية)على الطبق وليس على الغطاء( 11 أتباع األسلوب السليم في التخلص من أي مواد)حيوية أوكيميائية( 11 ضرورة مراعاة النظافة والدقة في العمل في جميع التجارب الن التعامل سوف يكون مع كائنات حية دقيقة كما أن التلوث قد يحدث بسرعة ومن اقل األسباب لذلك يجب االهتمام بجميع المواد المستعملة في المختبر. 12 العمل. 13 قراءة التعليمات الخاصة بكل تجربة بدقة قبل البدء في العمل والتأكد تخلص من المواد التالفة مثل (وضعها في المكان المعد لها وكذلك وضع )القاذورات واألوراق تماما المستعملة واألغطية القطنية األوساط الغذائية الغير صالحة من معرفة طريقة واألواني لالستعمال المخصص لها وال تلقى في أحواض الغسيل وال تترك على المنضدة أو على أرض المختبر. 14 تأكد من توافر محتويات صندوق اإلسعافات ووضعها في مكان بارز والتأكد من صالحيتها. 15 التأكد من توافر طفاية الحريق ووضعها في مكان مناسب والتأكد من صالحيتها. ثانيا : التعامل مع الزجاجيات 2 4 ال 1 اغسل األدوات الزجاجية جيدا قبل االستخدام وبعده,وجففها بالمجفف. تحاول جمع الزجاج المكسور بيديك, بل استخدم األدوات المناسبة لذلك. 3 تجنب عند استخدامك الماصة طريقة السحب بالفم واستخدم بدال من ذلك المضخة المطاطية. ا ستخدم المالقط الخاصة عند اإلمساك باألدوات الزجاجية الساخنة. الزجاجية في المكان 4

6 5 عند قطع أنبوب زجاجي, أو إدخاله في أنبوبة مطاطية, بالزيت أو الجليسرين أو الماء. أمسك طرفه بقطعة قماش, وادهن طرفه اآلخر 6 في حالة إدخال أنبوب زجاجي في ثقب سدادة فلين, يفضل أن يكون اتساع الثقب مساويا قطر األنبوب. أمسكه بقطعة قماش من طرفه البعيد عن السدادة, وادهن الطرف اآلخر بالجليسرين أو الماء, وادفع بلطف بحركة دائرية. 7 تعر ف على كيفية قطع األنابيب الزجاجية, وتنعيم لهب موقد بن زن. ثالثا : استخدام المواد الكيميائية حافتاها عن طريق تسخينها بلطف مع تدويرها على 1 احمل عبوات المواد الكيميائية بحذر, واستخدم الكمية المطلوبة دون إسراف, وال ترجع الكمية الزائدة إلى العبوة األصلية إنما احفظها في عبوات صغيرة مع تدوين اسم المادة عليها. 2 عند التعامل مع مواد ينتج منها غازات ضارة كاإليثر والفورمالدهيد, استخدم خزانة طرد الغازات, أو وف ر تهوية جيدة لقاعة المختبر. 3 عدم التعرض ألبخرة الفورمالين والتقليل من تأثيرها. رابعا : االحتياطات عند استخدام المجهر أمسك المجهر من الذراع بإحدى يدديك ومدن القاعددة باليدد األخدرى, وأبقده فدي وضدع عمدودي, وضدعه برفق على الطاولة. نظف المرآة قبل استخدام المجهر وبعده. اسدددتخدم ورق تنظيدددف العدسدددات لتنظيدددف العدسدددة العينيدددة والعدسدددة الشدددي ية, وال تسدددتخدم أي أوراق تجفيف أخرى, حيث يمكن أن يكون هذا الورق وبريا وبالتالي يترك اثر على العدسات والجهاز. ي مت تنظيف العدسات بواسطة محلول الزيلول أو الكحدول المخفدف وذلدك بغمدر ورقدة التنظيدف بقليدل من المحلول وينظف برفق. احدددرى علدددى نظافدددة الشدددريحة قبدددل اسدددتخدامها, وذلدددك بتنظيفهدددا بالمددداء والصدددابون وتجفيفهدددا بدددورق التجفيف مع مراعاة مسكها من األطراف. ارفع األنبوب عن المنضدة مسافة مناسبة قبل وضع الشريحة باسدتخدام الضدابط الكبيدر, ابددأ بالعدسدة الشي ية الصغرى, ثم تدرج إلى الكبرى. إذاكان المجهر مزودا بمرآة, فاحذر استخدام أشعة الشمس مصدرا للضوء, ل ال تؤذي عينيك

7 خامسا : االحتياطات عند إعداد التحضيرات المجهرية 1 يجددب أن تكددون الشددرائح واألغطيددة الزجاجيددة نظيفددة تمامددا مددن الغبددار أو الدددهون وذلددك بتنظيفهددا بالمدداء والصابون وتجفيفها بورق التجفيف. 2 يجب تجنب مسكها من أسطحها المنبسطة بل تمسك من حوافها )األطراف(. 3 امسك الغطاء الزجاجي بين سدبابة وإبهدام اليدد اليسدرى وضدعه مدائال بحيدث تلمدس حافتده وسدط التحميدل وأسند الحافة األخرى للغطاء بطرف إبدرة تشدريح نظيفدة ثدم اضدغط اإلبدرة بدبطء حتدى يأخدذ الغطداء مكانده )إذا لم تعتن بوضع الغطاء يؤدي ذلك إلى تكون فقاعات الهواء(. 4 يلزم عند وضع الشريحة على المنضدة أن يكون غطاء الشريحة أعلى وليس العكس. سادسا : االحتياطات عند التشريح فحص الحيوان والتأكد من سالمته قبل البدء في التشريح. ال تستخدم األدوات المعدنية الصدئة في عمليات التشريح والتحنيط. 3 احذر عند استخدامك أدوات التشريح فجميعها حادة, وإذا جرحت فعقم مكان الجرح مباشرة. استخدم القفازات المطاطية عند التشريح. 5 بعد االنتهاء من التشريح نظف أدوات التشريح ثم جففها جيدا وأدهنها بطبقة من الفازلين ( حتى ال تصدأ ) واحفظها في علبها الخاصة بها 1 سابعا : االحتياطات عند أخذ العينات 1 استخدم منكاش أسنان عريض الطرف لمرة واحدة فقط عند أخذ عينة خاليا من باطن الخد. 2 ال تحاول أخذ عينات الدم من الطلبة المطهر وإبرة خاصة معقمة ومغلفة,تستخدم مرة واحدة فقط. بهدف تحديد نوع الدم,وإنكان البد مدن ذلدك فيجدب اسدتخدام 3 اسدتخدم أدوات نظيفدة ومعقمدة وغيدر صددئة عندد أخدذك عيندة حيوانيدة أو نباتيدة لتحضدير شدريحة دائمدة أو مؤقتة منها. ثامنا : االحتياطات عند التعامل مع العينات المحفوظة 6

8 1 اكتب اسدم العيندة وتداريح تحضديرها ومكدان جمعهدا واسدم مدن قدام بحفظهدا علدى بطاقدة خاصدة تلصدق علدى العبددوة أو علددى قاعدددة حمددل العينددة عندددما ترغددب فددي حفظهددا بالفورمددالين أو أي محلددول حفددظ آخددر أو تحنيطها. 2 اغسل العينات المحفوظة بالفورمالين أو بمحاليل الحفظ األخرى جيدا بالماء قبل استخدامها. 3 خصص خزانة خشبية ذات وجه بلوري لحفظ العينات وعرضها. 4 تخلص من العينات المتحللة بأسدرع وقدت ممكدن كدي ال تصدبح مرتعدا للجدراثيم والميكروبدات ممدا يشدكل خطرا على من يستخدمها أو يتعامل معها ويمكن مالحظة تحلل العينة عند بدء تغيدر لدون محلدول الحفدظ من اللون الشفاف إلى اللون األصفر أو البني. تاسعا : االحتياطات عند التعامل مع الحيوانات 1 يجب لبس القفازات عند مسك الحيوانات كاألرانب والف ران وغير ذلك. 2 تجنب إدخال أصابع اليد في أقفاى الحيوانات. 3 تجنب إدخال الحيوانات السامة كالعقارب واألفاعي إلى مختبر المدرسة. 4 عليك الرفق بالحيوانات والعناية بها وإطعامها, وتوفير الماء لها وتنظيف أقفاصها. عاشرا : االحتياطات عند التعامل مع النباتات تعر ف النباتات السامة في منطقتك, واحذر التعامل معها. ال تأكل أي جزء من نبات مخصص لغرض المختبر. ال تمسح عصير نبات بجلدك, أو بجرح مفتوح. ال تستنشق دخان األجزاء النباتية المحترقة, أو تعرض جلدك أو عينيك لها. ال تقطف األزهار البرية, وال تقلع النباتات البرية التي تجهل خواصها. عندد جمدع بعدض النباتدات يجدب االسدتعانة بملعقدة أو سدكين لتحفدر حدول الجدذور ثدم تنظدف مدن التدراب برفق. اغسل يديك جيدا بالماء والصابون عند استخدام النباتات, وقبل مغادرة المختبر. عند استخدام أزهار النباتات يجب أن ال تنتشر حبوب اللقاح بكثرة داخل قاعة المختبر, ألنه قدد يكدون لبعض الطالب حساسية منها

9 ال 8 الحادي عشر: االحتياطات عند إجراء التجارب على الفطريات والبكتيريا 1 احددذر عنددد اسددتخدام الفطريددات, فقددد يكددون لدددى بعددض الطلبددة حساسددية مددن أنددواع الفطريددات, وربمددا يتسبب ذلك في مشكالت كالعطاس, والربو وغير ذلك. 2 ال تزرع البكتيريا التي تسبب األمراض في المختبرات المدرسية. 3 امسح طاولة العمل بالمادة المطهرة والمجهزة لهذا الغدرض قبدل إجدراء التجربدة وبعدده )سيرشددك المعلدم إلى كيفية التعامل مع المواد الملوثة(. 4 أثناء عملية الزراعة ابق لهب بنزن مشتعال. 5 ال تضددع المددزارع البكتيريددة cultures) ) bacterial الموجددودة فددي أنابيددب علددى طاولددة العمددل مباشرة, بل ضعها في الحوامل أو السالسل أو أي وعاء آخر مخصص لهذا الغرض. 6 عق م حلقة العزل أو اإلبرة الناقلة قبل كل استعمال وبعده. 7 ضدددع المدددواد الملوثدددة materials) contaminated (والمدددزارع القديمدددة ونتدددائج العمدددل فدددي األوعية المخصصة لذلك ويفضل إتالفها بالحرق أو بقدر الضغط. تترك المزارع محفوظة مدة طويلة في الحاضنات. 9 ال تسدددتعمل الفدددم عندددد اسدددتخدام الماصدددات لنقدددل المدددزارع البكتيريدددة. وفدددي حالدددة عددددم تدددوافر الماصدددات الميكانيكية, يستحسن وضع كمية من القطن في النهاية العريضة للماصة قبل تعقيمها. 11 اغسل يديك بالكحول مباشرة بعد االنتهاء من عملية الزراعة. 8

10 الفصل الثاني تصنيف وجتهيزات خمترب األحياء 9

11 تصنف أجهزة االحياء وتوزع حسب المجموعات التالية : المجموعة األولى: األجهزة واألدوات : 23 الماصات الزجاجية Pipettes(.)Glass 1 المجهر الضوئي Microscope( )The Light 24 الشرائح الميكروسكوبية Slides( )Microscopical 2 المجهر التشريحي 25 أغطية الشرائح) Slip )Cover Slide or Cover. 3 المجهر الرقمي 26 لهب بنزن Burner( )Bunsen 4 مجهر بسيط ( عدسة مكبرة ) 27 جهاز التقطيع الدوار ( الميكروتوم ) ابر تلقيح البكتيريا ذات عقدة ( Inoculating 5.)Loop 28 جهاز التقطيع الهزاز ابر تلقيح الفطريات )مستقيمة( ( Inoculating 6 )Needle 29 جهاز التقطيع اليدوي أنابيب لحفظ المزارع الميكروبية Tubes(.)Culture 7 31 الحاضنة أو الحضان )Incubator( ثاقب فليني Borer( )Cork جهاز الطرد المركزي ماسك شرائح, أنابيب.)Holder( 9 32 جهاز معقم الهواء الساخنsterilizer Hotair ملقط )Forceps( الموصدة )جهاز التعقيم بالبخار تحت الضغط 33 ورق ترشيح Paper( )Filter. )Autoclave( 34 الكلينوستات دورق مدرج )Flask( 12 جهاز التنافذ االنتشار الغشائي 35 كأس مدرج ذو فوهة متسعة )Beaker( 13 graduatedcylinder جهاز قياس النمو في النبات 36 مخبار مدرج 14 ) watch جهاز قياس النتح في النبات ( البوتوميتر ) 37 زجاجة ساعة glass( 15 10

12 38 جهاز تقدير معدل التنفس ( جانوج ) الترمومتر )Thermometer( ملقط) Forceps (. 17 جهاز تسجيل انقباض العضلة 41 قمع )Funnel(. 18 جهاز ديكسون )نظرية التماسك في صعود العصارة ) 41 مسحة قطنية معقمة Swab(.)Cotton 19 حمام مائي Bath(.)Water 42 حامل أنابيب )Rack(. 21 شبكة الصطياد الحشرات 43 ملعقة مختبر) spoon.)spatula Lab 21 الميزان الحساس) scales.)delicate 22 أطباق بتري Dishes( )Petri المجموعة الثانية: النماذج والمجسمات : مثل : نموذج الهيكل العظمي البشري نموذج القلب البشري نموذج األذن البشرية...الح المجموعة الثالثة: الشرائح المجهرية المحضرة : مثل نسيج عضلي قلبي بشري خاليا دم حمراء بشرية خاليا دم بيضاء المجموعة الرابعة : المواد الكيميائية بشرية...الح : صبغة رايت محلول بندكت يود كلوروفورم...الح المجموعة الخامسة : اللوحات التعليمية 11

13 كيفية تصنيف جتهيزات خمترب األحياء: عند تصنيف التجهيزات المخبرية الخاصة بمختبر األحياء, ال بد من مراعاة القواعد اآلتية لضمان سالمتها وسالمة المتعاملين معها : أوال : المواد الكيميائية: تصنف المواد الكيميائية وتحفظ في خزائن خاصة ذات تهوية جيدة, وبعيدة عن متناول أيدي الطلبة وتجمعاتهم وحركتهم ويستحسن أن توضع هذه الخزائن في غرفة التحضير. وقبل استقبال أي مادةكيميائية لخزنها يجب التعرف عليها بدقة من حيث: اسمها مكوناتها,التعليمات الخاصة بخزنها, وكيفية استعمالها,ومخاطرها,والتأكد أن المعلومات األساسية الخاصة بها مثبتة عليها, وهذه المعلومات هي : االسم العلمي للمادة الكيميائية و الرمز الكيميائي لها و اإلرشادات التحذيرية الخاصة بها, تركيزها. 1 توضع خزائن حفظ المواد الكيميائية بعيدا عن أشعة الشمس المباشرة, ويجب فتحها باستمرار, إذا لم تكن مزودة بفتحات تهوية, لتهويتها من الداخل. 2 يفضل أن توضع العبوات الكبيرة في الرفوف السفلى من الخزانة, في حين توضع العبوات الصغيرة في الرفوف العليا. 3 تصنف العبوات في الرف الواحد بحيث توضع الكبيرة منها في الخلف, في حين توضع العبوات الصغيرة في األمام ليسهل عملية تناولها. 4 تبعد المواد المؤكسدة عن المواد العضوية قدر اإلمكان. 5 تفصل المركبات العضوية عن المركبات غير العضوية. 6 يحذر وضع أي جهاز في خزانة حفظ المواد الكيميائية منعا لتلفها من جراء الغازات واألبخرة المتصاعدة من هذه المواد. ثانيا : الشرائح المجهرية: تحفظ الشرائح المجهرية في صناديق خشبية أو علب بالستيكية مدون على كل شريحة اسمها ورقمها ويثبت, قائمة داخل أو خارج الصناديق أو العلب تحتوي على اسم الشريحة,ورقمها, وعددها وذلك لتسهيل عملية 12

14 التعرف عليها وتناولها وقت الحاجة, وتوضع في مكان جيد التهوية وبعيدة عن الرطوبة, لمنع نمو العفن والفطريات على الشرائح المجهرية المحضرة مما يؤدي إلى تلفها مع الزمن, ولمنع تأثر األلوان. ثالثا : األجهزة واألدوات : 1 األدوات الزجاجية : تحفظ األدوات الزجاجية في خزانة خاصة بها, ويتم تنظيفها قبلكل استخدام وبعده, ثم يعاد ترتيبها بشكل مناسب في الخزانة الخاصة بها بعد تجفيفها بشكل جيد بورق تجفيف ناعم في حالكونها كبير الحجم, أما في حال كون هذه األدوات صغيرة الحجم فيتم تجفيفها باستخدام فرن التجفيف وذلك بعد غسلها. 2 األجهزة واألدوات غير الزجاجية : يتم حفظها في خزانة خاصة بها بعيدا عن المواد الكيميائية, منعا من وصول الغازات المتصاعدة من هذه المواد إليها, مما يسبب تلفها. تنظف هذه األدوات واألجهزة بشكل دوري وباستمرار, منعا من تراكم الغبار عليها, مما يؤدي مع مرور الزمن إلى تشكل طبقة من األوساخ عليها, والتي قد تتلفها, وبالذات اإللكترونية منها, أما المجاهر فيجب إعادتها إلى صناديقها الخاصة بها بعد كل استخدام, على أن توضع الصناديق في مكان بعيد عن الرطوبة, وأشعة الشمس المباشرة, وإذا اقتضت الضرورة إبقاء المجهر على طاولة العمل المخبري الستخدامه في الحصص التالية, فيجب فصله عن التيار الكهربائي, وتغطيته بغطائه البالستيكي الخاى به, كما ويجب تنظيف المجهر وعدساته باستمرار, منعا من تشكل طبقة من الغبار على العدسات قد تؤدي إلى تلفها. أما األجهزةكبيرة الحجم, والتي ال يمكن وضعها داخل خزائن خاصة بها, فيجب وضعها في مكان مناسب, بعيدا عن أشعة الشمس المباشرة, والرطوبة, كما ويجب تغطيتها باألغطية البالستيكية الخاصة بها لمنع الغبار من الوصول إليها. أما بالنسبة لألجهزة الكهربائية األخرى, كالحاضنة وفرن التجفيف وجهاز الطرد المركزي, فيجب فصل التيار الكهربائي عنها مباشرة بعد االنتهاء من استخدامها. رابعا : النماذج والمجسمات: تحفظ النماذج إن كانت صغيرة الحجم, كنماذج األذن والعين والكبد والقلب في خزانة خاصة ذات واجهة بلورية, أما إن كانت النماذج كبيرة الحجم,كنموذج الهيكل العظمي ونموذج جذع اإلنسان, فيتم حفظها في المكان الذي يراه محضر المختبر مناسبا, شريطة أن تكون بعيدة عن أشعة الشمس المباشرة والرطوبة والغبار, كما ويجب تغطيتها جيدا باألغطية البالستيكية الخاصة بها. 13

15 أدوات خمترب األحياء أطباق بتري تصب فيها البي ات المعقمة والتي تستعمل فيما بعدكمزارع للميكروبات. )Petri Dishes( 1 الماصات الزجاجية تستخدم لسحب قياس محدد Pipettes( )Glass ومعروف من السوائل المختلفة. 2 لهب بنزن يستعمل في عملية التسخين والتعقيم Burner( )Bunsen المباشر باللهب. 3 ابر )ذات عقدة(.)Inoculating Loop( ابر )مستقيمة( )Inoculating Needle( تستعمل في عملية تلقيح البكتيريا والفطريات. 4 أنابيب اختبار Culture Tubes( ثاقب فليني )Cork Borer( تستعل في تجارب الكشف عن المواد الغذائية,وحفظ المزارع الميكروبية. يستعمل لعمل ثقب في البي ة النامي عليها الفطر )ديسك(,ويستخدم الديسك مقلوبا لزراعة الفطر على أطباق مزرعيه جديدة

16 ورق ترشيح يستعمل لترشيح السوائل والحصول Paper( )Filter على سائل رائق خالي من الشوائب. 7 قياس الحجوم الثابتة تحضير محاليل لها تركيزات محددة دورق مدرج )Flask( 8 كاس مدرج ذو فوهة متسع قياس حجوم السوائل )Beaker( 9 قياس حجوم السوائل مخبار مدرج نقل السوائل graduatedcylinder قمع )Funnel( صب السوائل ونقلها من إناء آلخر وزن المواد الصلبة زجاجة ساعة ) watch glass( 12 قياس درجة الحرارة الترمومتر )Thermometer( 13 15

17 ماسك أنابيب.)Holder( لحمل األنابيب أثناء تجارب التسخين 14 ملقط مسك األجسام لمنع الجزء المراد دراسته من التمزق )Forceps( 15 قطارة نقل األحجام الصغيرة من السوائل 16 ملعقة مختبر لنقل المواد الكيميائية الصلبة لعدم لمسها باليد Spatula Lab )spoon) 17 حامل أنابيب توضع فيه األنابيب وهو الوضع )Rack(. اآلمن والصحيح لحفظها في المختبر 18 فرشة تنظيف لتنظيف األنابيب بعد استخدامها )Lab Brushes( 19 الميزان االلكتروني لوزن المواد الكيميائية ووزن بعض البي ات.)Delicate scales( 21 شبكة الصطياد الحشرات 21 16

18 ناقوس زجاجي للتخدير تجارب التنفس 22 يوضع عليها العينة المراد فحصها. الشرائح المجهرية Microscopical Slides 23 أغطية الشرائح يتم استعمالها مع الشريحة عند استخدام القوة الصغرى والكبرى للعدسات الشي ية. Cover Slide or (. )Cover Slip 24 صندوق لحفظ الشرائح المجهرية Slides Box طبق تشريح Dissection Tray لوحة خشبية للتشريح يستوعب 111 شريحة,مقاس 3 1 بوصة تثبت في مجاري من البراس والصندوق مصنوع من الخشب الصلد ومشطب بشكل جيد. مصنوع من أجود أنواع األلمنيوم ذو حواف بارزة أبعاده : سم 6,5 سم تقريبا يحتوي على طبقة من الشمع األسود والخاى بالشرائح ذات سطح أملس مستوي وبعمق 1 سم لوحة من الخشب القابل لتدبيس العينات عليها دون إحداث خدوش, والحواف ترتفع بمقدار 1.7 سم على هي ة إطار, األبعاد 55 سم 41 سم )طول عرض( تقريبا

19 أدوات التشريح : تحفظ في علبة خاصة وتحتوي على: 28 المشددارط : عددددها 32 مختلفددة الحجددم ومددن الضددروري أن تكددون حددادة وتسددتخدم فدديكسددر العظددام فددي بعددض المندداطق التددي ال يمكددن اسددتخدام المقددص فيهدداكددذلك تسددتخدم فددي عمليددة التسددليك لفصددل الجلد عن األجهزة. المقصات : عددها عادة اثنان احدها ذو طدرف رفيدع مددبب وصدغير ودقيق لتشريح األنسجة الدقيقة واألخر ذو طرف عريض وقوي وكبيدر لقص العظام حيدث ال يمكدن اسدتخدام المقدص الصدغير لقطهدا إذ أنهدا تسبب تلفه. مالقدط : عدددها عدادة اثندان احددها ذو طدرف رفيدع واألخدر ذو طدرف عريض نوعا ما وتستعمل لالمساك بالجلد أثناء عملية التشريح. إبرة التشريح: وهي مثبتة في مقبض. دبددددابيسكبيددددرة وصددددغيرة : لتثبيددددت الحيددددوان وخدددديط لددددربط األوعيددددة الدموية و اسفنجة. فرشدددة صدددغيرة : للتنظيدددف والمسددداعدة فدددي إزالدددة األغشدددية المخاطيدددة وبالنسددبة للقطاعددات النباتيددة يمكددن أن تسددتعمل فرشدداة ناعمددة لحمددل القطاعددات واألجددزاء النباتيددة الرقيقددة بلطددف حتددى ال تتهتددك األنسددجة أثناء التعامل معها. مددوس التشددريح : ويسددتخدم فددي عمدددل القطاعددات الرقيقددة فددي أجددزاء النبات بغرض دراسة تركيبها الداخلي. زجاجدددات السددداعة: وهدددى آنيدددة زجاجيدددة مقعدددرة توضدددع فيهدددا العيندددات والقطاعات. طبدددق تشدددريح : عبدددارة عدددن إنددداء مسدددتطيل أو مسدددتدير بددده خلددديط مدددن الشمع المنصهر مع الفحم. 18

20 المجهر البسيط ( العدسة المكبرة ) التركيب : الفصل الثالث أجهزة خمترب األحياء عدسة محدبة ذات بعد بؤري صغير على حامل متغير االرتفاع االستخدام : تكبير األشياء الصغيرة مثل الشعيرات الجذرية ومسامات الجلد في اإلنسان المجهر التشريحي Microscope) )Dissecting التركيب : ال يختلف في تركيبة عن المجهر المركب إال في األجزاء التالية : 1 المنصة : وهي مستقلة في المجهر المركب,ويمكن رفعها وخفضها باستخدام الضوابط لتوضيح الصورة, أما في المجهر التشريحي فهي غير موجودةكجزء مستقل وإنما تستخدم القاعدةكمنصة,كما أن الجزء الذي يتحرك إلى أعلى وإلى أسفل لتوضيح الصورة هو رأس المجهر الذي تثبت عليه العدسات العينية والشي ية. 2 مصدر الضوء : في المجهر المركب مصدر واحد تحت المنصة,أما في المجهر التشريحي فيستخدم مصدران للضوء,يقع احدهما تحت الجسم المراد فحصه,ويكون اآلخر أعلى الجسم لتوضيح أجزائه العلوية. 19

21 طريقة استعماله والعناية به : ال تختلفكيفية استعماله والعناية به عنكيفية استعمال المجهر المركب االستخدام : ويستخدم هذا المجهر لفحص الحيوانات والنباتات الصغيرة وأجزائها, مثل :النحلة,الذباب...الح والتي ال نستطيع مشاهدتها بوضوح بالعين المجردة. وال حاجة هنا إلى عمل مقاطع رقيقة في الكائن الحي.ونرى بهذا المجهر األشياء مجسمة أي في ثالثة أبعاد ويتراوح مدى تكبيره من 51,6 مرة المجهر الضوئي المركب أجزاء المجهر الضوئي المركب: يتكون من األجزاء التالية: )الحظ الشكل 1( 1 العدسة العينية lens) :(Ocular eyepiece هي العدسة التي نرى من خاللها, وهي تقع في الجزء العلوي من االسطوانة الصغيرة للمجهر, حيث أن قوة تكبير هذه العدسة مكتوب عليها وهي بالعادة عشر مرات )X 10(. 2 االسطوانة tube) :(Body وهي الجزء االسطواني في المجهر التي تحمل في أعالها العدسة العينية. 3 العدسات الشي ية lenses) :(Objective وهي مجموعة من ثالث إلى أربع عدسات متصلة بالقرى, وتكون العدسة القصيرة منها في الغالب ذات القوة التكبيرية الصغرى (X 4) والعدسة الشي ية المتوسطة ذات القوة التكبيرية الوسطي (X 10), والعدسة الشي ية الكبرى ذات القوة التكبيرية العليا (x 40) ويوجد أيضا العدسة الزيتية التي 20

22 تصل قوة تكبيرها إلى 111 مرة (x 100). مالحظة: في حالة استخدام العدسة الزيتية يتم إضافة مادة خاصة لرؤية أوضح تسمى immersion) (oil أما بالنسبة لباقي العدسات تستخدم دون إضافة أية مواد. 4 المنضدة :(Stage) وهي السطح الذي نضع عليه األجسام المراد فحصها ويوجد في مركزها فتحة صغيرة تسمح بمرور الضوء خالل الشريحة. 5 المكثف :(Condenser) يوجد المكثف تحت فتحة المنضدة, ووظيفته تجميع أشعة الضوء حيث نستطيع التحكم بتركيز الضوء الموجه إلى الشريحة وذلك بتحريكه إلى أعلى والى أسفل. 6 الحجاب الحدقي diaphragm) :(Iris وهو جزء مثبت على السطح السفلي للمنضدة وبواسطته نستطيع تنظيمكمية الضوء الداخلة إلى العدسة الشي ية من خالل الشريحة. 7 القرى Piece) :(Revolving Nose وهو جزء دائري متصل بالجزء السفلي من االسطوانة وتستعمل لتغيير أوضاع العدسات الشي ية المتصلة به. 8 الضابط الكبير adjustment) :(Coarse الضابط الكبير عبارة عن عجلهكبيرة موجودة على جانبي المجهر, تستعمل لتنظيم المسافة بين المنضدة والعدسة الشي ية للحصول على رؤية واضحة, حيث يتم استعمالها في حال العدسة ذات القوة التكبيرية الصغرى (x 4) أو القوة التكبيرية الوسطي (x 10) 9 الضابط الصغير adjustment) :(Fine الضابط الصغير عبارة عن عجلة صغيرة موجودة أيضا على جانبي المجهر حيث تستخدم للمساعدة على رؤية الهدف 21

23 بصورة أوضح, ويتم استخدام الضابط الصغير في حال استخدام العدسة الشي ية الكبرى (x 40) أو العدسة الزيتية (100 x) 11 المرآة أو المضيء Illumination) :(Mirror or ووظيفة المرآة عكس وتوجيه األشعة من مصدر خارجي إلى العدسة الشي ية مارة بالشريحة المراد تكبيرها, وللمرآة سطحان أحداهما مستو واآلخر مقعر, وذلك للتحكم بكثافة الضوء المنعكس, وقد استعيض عن المرآة في المجهر الجديد بمصدر ضوئي ثابت يدعى المضيء. 11 الضاغدط :(Clip) وهناك ضاغطان على المنضدة يستعمالن لتثبيت الشرائح عليها. 12 الدذراع :(Arm) وهي الدعامة التي تستعمل لحمل المجهر والتي تحمل أيضا االسطوانة. 13 القاعددة :(Base) وهي الجزء السفلي الذي يرتكز عليه المجهر. 22

24 كيفية استعمال المجهر المركب: بما أن المجهر هو النافذة التي نطل بواسطتها علدى الكائندات الحيدة التدي ال نسدتطيع رؤيتهدا بدالعين المجدردة, لدذا يعتبر المجهر المركب األداة الرئيسية التي ترمز إلى علم الحياة. إذن: علينا أن نفهمكيف نستعمل هذا المجهر استعماال صحيحا وكيف نستطيع العناية بهذه األداة الحساسة. أ. عند إخراج المجهر من صندوقه الخاى أمسكه من الذراع بيدك اليمنى ومن القاعدة باليدد اليسدرى وأبقده بوضع عمودي موازيا لجسمك وضعه برفق على الطاولة بحيث يبقى بعيدا عن حافة الطاولة. ب. عند استعمال المجهر اتبع الخطوات التالية: 1.نظف العدسات العينية والشي ية بورق عدسات خاى. 2. تأكد من أن العدسة الشي ية الصغرى في مركزها الصحيح فوق ثقب المنضدة. 3. افتح الحجاب الحدقي إلى النهاية. 4. ضع شريحة على المنضدة وثبت الشريحة بواسطة الضاغط, بحيث تكون العينة المراد فحصدها فدوق الثقب مباشرة وتحت العدسة الشي ية األخرى. 5. انظر خالل العدسة العينية بكل يت عينيك, وحرك الضابط الكبير إلى أعلى حتدى تتضدح صدورة الجسدم المراد فحصه, وهذا قد يتطلب تحريك الشريحة قليال ليصبح الجسم فوق الثقب مباشرة. 6.افتح وأغلق الحجاب الحددقي, وارفدع وأندزل المكثدف حتدى تحصدل علدىكميدة مدن الضدوء تظهدر معهدا الشريحة بوضوح. 7. إذا أردت الحصدددول علدددى تكبيدددر أفضدددل, بددددل العدسدددة الشدددي ية الصدددغرى بالعدسدددة الشدددي ية الوسدددطي بواسدطة القدرى, وذلدك بوضدع العدسدة الشدي ية الوسدطي فدي مكانهدا فدوق الثقدب مباشدرة وهندا تشدعر بضربة خفيفة, ثم حرك الضابط الكبير لتظهر الصورة بوضوح. 8. لرؤيددة أكبددر وأوضددح بإمكانددك اسددتخدام العدسددة الشددي ية الكبددرى, ثددم حددرك الضددابط الصددغير لتظهددر الصورة بوضوح. 9. بعدددد االنتهددداء مدددن فحدددص الجسدددم, أدر القدددرى حتدددى تصدددبح العدسدددة الشدددي ية الصدددغرى فدددوق ثقدددب المنضدة, وأزل الشريحة, وأعد المجهر إلى خزانته بعد وضع غطائه عليده بدنفس الطريقدة التدي وردت في )أ( من هذه الخطوات. 23

25 العناية بالمجهر وطريقة تنظيفه: المجهر جهاز ثمين يجب العناية به, لذا اتبع الخطوات التالية: 1. اسدتخدم الضدابط الكبيدر إلندزال المنضددة إلدى األسدفل للحصدول علدى مسدافة أكبدر للعمدل, ثدم قدم بإزالدة الشريحة عن المنضدة. 2. تأكدددد مدددن أن الشدددرائح نظيفدددة لددديس عليهدددا غبدددار, وتجندددب مسدددك الشدددريحة مدددن الوسدددط, وامسدددكها مدددن األطراف. 3. يجب تنظيف العدسات العينية والشي ية قبل استعمال المجهر وبعده, ومدن آن آلخدر ترفدع العدسدة العينيدة من مكانها وتفك أجزاؤها وتنظف من الداخل والخارج أما العدسات الشي ية فتنظف مدن الخدارج إذا أنهدا محكمة اإلغالق ال يتسرب الغبار إلى داخلها,كما ال يجب عدم العبث بها ألن أي خدش لها سيتلفها. 4. يجب أن يستعمل فدي تنظيدف العدسدات دائمدا ورق تنظيدف العدسدات الخداى وتجندب اسدتعمال القمداش أو القطددن أو ورق التنشدديف, إذ أندده قددد يخدددش العدسددات كمددا أندده قددد يتددرك عليهددا وبددرا ممددا يسددبب عدددم وضوح رؤيتها بالمجهر. 5. بعد االنتهاء من تنظيف المجهر أعد العدسة الشي ية الصغرى إلى مكانها. 6. أعد المجهر إلى خزانته بعد وضع غطائه عليه. حساب قدوة التكبير: ولحساب التكبير الكلي للجسم المراد فحصه تحت المجهر اتبع الطريقة التالية: 2. الحظ قوة تكبير العدسة العينية بقراءة الرقم المكتوب عليها وهو عادة )11( مرات (x 10). 3. الحظ قوة تكبير العدسة الشي ية بقراءة الرقم المكتوب عليهدا وهدو يختلدف بداختالف العدسدات الشدي ية, ولنفدرض أندك اسدتعملت العدسدة الشدي ية الكبدرى التدي قدوة تكبيرهدا عدادة )41( مدرة (x 40) فدان قدوة التكبير الكلية للجسم = العدسة العينية العدسة الشي ية 400 x = 40 x 10 x 24

26 المجهر الرقمي: هددو مجهددر ضددوئي مددزود بعدسددة القطددة ومتصددل بجهدداز الحاسددب اآللدي مدن أجدل عدرض شريحددة مجهريدة أو عينددة مجهريدة مدن خدالل برندددامج حاسدددوبي خددداى سدددواء بواسددطة شاشدددة الحاسددب أو جهددداز التلفزيون أو جهاز عرض البيانات ( الداتاشو ) مميزاته : 1 إمكانية تحويل الشريحة إلى ملف حاسوبي. 2 تخزين عدد كبير من الشرائح المجهرية. 3 إمكانية طباعة أو تعديل الشريحة. 4 إمكانية اخذ لقطات للشرائح التي تمر بتغيرات على فترات. 5 إمكانية توصيله بالحاسب أو التلفاز أو جهاز عرض البيانات )الداتاشو ) التعريف بمكونات حقيبة المجهر الرقمي: 1 مجهر ضوئي مزود بعدسة القطة )كاميرا(. 2 البرنامج الحاسوبي Motic Images Plus 2.0 ML 3 البرنامج الحاسوبي Motic Images Assembly 1.0 ML Education الخاى بتعديل الصور التي تم التقاطها بواسطة المجهر. 4 موصالتكهربائية. 5 كتيبات توضح تشغيل الجهاز وطرق العناية به وصيانته. 25

27 6 الشريحة الزجاجية للمعايرة. 7 قطارة للعدسة الزيتية. 8 عدد 3 لمبات ( قطع غيار(. 9 علب للعينات المجهرية الحية. 11 أغطية العدسات العينية. 11 أغطية بالستيكية للحفاظ على الجهاز من الغبار. معلومات عامة عن سالمة الجهاز: البد من قراءة توجيهات استخدام الجهاز الموجودة داخل حقيبة الجهاز قبل استعماله ألن الفشل في التعامل مع هذه التوجيهات قد يؤدي إلى بعض النتائج السلبية مثل الصدمات الكهربائية واإلصابات الشخصية أو تعرض الجهاز للضرر و التلف أو الحريق التضع المشروبات أو السوائل األخرى على الجزء األعلى من جهاز العرض, وال تضع الجهاز بالقرب من مصادر المياه مثل الحمام وأحواض الغسيل ألن السوائل يمكن أن تتسرب إلى داخل الجهاز مما يؤدى إلى تدميره أو تلفه. ال تضع الجهاز في مكان يتعرض فيه سلك التوصيل الكهربائي إلى سوء االستخدام أو في ممر عام حتى ال يتعرض إلى الضغط عليه بأقدام المشاة معلومات عامة عن العناية بالجهاز: يجب عدم تنظيف الهيكل الخارجي للجهاز بمذيبات عضوية مثل التي تحتوي على األسيتون. قم بمسح الهيكل الخارجي للجهاز بقطعة قماش ناعمة. أحفظ الجهاز بعيدا عن التعرض لألمطار أو الجليد أو درجات الحرارة شديدة االرتفاع أو البرودة أو الغبار نظافة عدسات الكاميرا : قم بإزالة غطاء العدسات بحذر وضعه جانبا. استخدم مادة غير كاشطة لتنظيف الزجاج كالمواد الناعمة

28 ال تستعمل السوائل والمحاليل أو المواد الكيمائية األخرى التي تستخدم في التنظيف والتي قد تؤدى إلى تلف العدسات. قم بتحريك القطعة التي تستخدمها في نظافة العدسة من الوسط إلى األطراف في حركة دائرية. قم بإعادة غطاء العدسات معلومات عامة عن صيانة الجهاز: أوال : ال تحاول صيانة الجهاز ما عدا اللمبات حيث أن داخل الجهاز ال يحتوي على أي قطع للمستخدم صيانتها أو استبدالها بنفسه. يمكن ثانيا : اتبع الخطوات التالية عند تغيير لمبات الجهاز: 1 تأكد من وضع الجهاز على وضع اإلقفال وفصله عن التيار الكهربائي قبل تغيير اللمبة. 2 استبدل اللمبة القديمة بجديدة بحذر. 3 ال تلمس سطح اللمبة بيدك إذاكانت متسخة أو عليها مادة دهنية وإذا حدث ذلك فقم بتنظيفها بقطعة قماش نظيفة. ثالثا : يجب الرجوع إلى الوكيل إلجراء أي صيانة على الجهاز, علما بأن أي إخفاق في أتباع هذه التوجيهات سوف يؤدي إلى إصابات شخصية خطيرة أو تلف الجهاز. مالحظة: إذا واجهتك مشكلة تتعلق بتشغيل الجهاز, فتأكد أوال من أنك قد قمت بتركيب الجهاز بطريقة صحيحة.كذلك يجب التأكد من فحص مواقع التوصيالت الداخلية والخارجية, وتحقق من وضع مفتاح الطاقة على التشغيل. 27

29 آلة القطع الدقيق الميكروتوم( Microtome ) الميكروتوم : هو جهاز يستخدم لعمل قطاعات في العينات ويتكون أساسا من : 1 سدكين حدادة تعمدل علدى عمدل قطاعدات رقيقدة مدع إمكانيدة الدتحكم فدي سدمك القطداع 114 ميكدرون من خالل تدريج خاى يحتوي على مؤشر لتحديد سمك القطاع. 2 حامددل يثبددت عليددهكتلددة مددن شددمع البددرافين المجهددزة والتددي بهددا العينددة المددراد عمددل قطاعددات رقيقددة جدددا فيها. أنواع الميكروتوم : 1 الميكروتوم اليدوي : االستخدام : يستخدم إلنتاج شرائح نباتية لفحصها عبارة عن سكين حادة تعمل على تقطيع العينات قطاعاتكبيرة مثل: قطاعات األسماك طريقة العمل : توضع العينة المراد أخذ الشريحة منها فيكتلة شمعية ( شمع البرافين ) يكون سطح العينة مساويا لسطح الميكروتوم يضبط ضابط السماكة حسب سماكة العينة المراد أخذها سماكة المقطع عادة ما بين )86 (ميكرون مالحظة : المقاطع األولى ليست بجودة المقطع الرابع أو الخامس يتثبت صفر المقطع على صفر الميكروتوم 28

30 2 الميكروتوم الدوار : التركيب : يتركب الميكروتوم الدوار من سكين في وضع ثابت والعينة متحركة بشكل مستمر,وعجلته تدار يدويا, وعند إدارة العجلة تتحرك الكتلة الشمعية إلى أعلى وإلى أسفل في اتجاه عامودي على السكين وبتكرار إدارة العجلة تالمس الكتلة الشمعية السكين وتنفصل القطاعات بحسب السمك المطلوب احتياطات عند االستخدام : يجب أن تكون العينة مطمورة بشمع البرافين ومثبتة على حامل العينة 3 الميكروتوم التركيب : الهزاز )ميكروتوم كامبرج( ذراع يرتكز بالقرب من إحدى طرفيه دعامة,وتثبت العينة في الطرف القصير من الذراع,كما توجد سكين في مثبتة بماسك بحيث تكون حافتها الحادة إلى أعلى وبزاوية قائمة على الذراع فعند تحريك العينة إلى أعلى وأسفل بواسطة تحريك الذراع إلى أسفل بواسطة تحريك طرف الذراع اآلخر تمر العينة على السكين وتنفصل القطاعات على حسب السمك المطلوب ( يمكن التحكم بالسمك بواسطة تدريج ميكرومتري ) احتياطات عند االستخدام : الجهاز غير مناسب لتقطيع العينات الكبيرة والصلبة الجهاز يميل إلى االنزالق والتأرجح أثناء عملية التقطيع نظرا لخفة وزنه, لذا يجب أن يوضع الجهاز على مكتبة أو وسادة من الفلين لمنع االنزالق كتلة الشمع كتلة الشمع السكين السكين 29

31 الحاضنة :)INCUBATOR) تركيب الحاضنة : تتركب الحاضنة, كما يظهر في الشكل أعاله من األجزاء الرئيسة اآلتية : 1 الباب الخارجي : ويكون إطاره غالبا من المعدن, ومزودا بنافذة من الزجاج, باإلضافة إلى مقبض إلغالق الحاضنة بشكل محكم. 2 الباب الداخلي : ويصنع عادة من الزجاج المقاوم للحرارة. 3 جسم الجهاز : ويتكون من جدارين : الخارجي وهو مصنوع من معدن مطلي بطالء مناسب, وقد يكون مصنوع من معدن ) steel (. Stainless 4 ميزان الحرارة : يثبت في أعلى الوجه األمامي للجهاز, أو على جانب جسم الجهاز, ويعمل على قياس درجة الحرارة الداخلية للحاضنة. 5 منظم الحرارة : يكون في الغالب على شكل قرد دائري, ويوضع في أسفل واجهة الجهاز أو في أعالها, ووظيفته التحكم في مقدار الحرارة الالزمة للعمل داخل الحاضنة. 6 مفتاح التشغيل ) OFF )ON : يستخدم لتشغيل الجهاز عند الحاجة ويكون في بعض األجهزة مزودا بإضاءة خضراء تضيء عند التشغيل الجهاز ووصول التيار الكهربائي إليه. 7 الضوء األحمر : يوجد هذا الضوء في معظم األجهزة, ويضيء عندما تصل درجة الحرارة داخل الحاضنة إلى الدرجة المثبتة على قرى منظم الحرارة 8 الرفوف : يتراوح عددها )2 4( رفوف, تتحرك من أماكنها بسهولة لتوسيع المسافة بينها أو تضييقها حسب الحاجة. 30

32 9 فتحات التهوية : توضع على جانبي الحاضنة, وتستخدم لتهوية الجهاز 11 ساعة التوقيت : تزود بعض الحاضنات بهذه الحاضنات بهذه الساعة لتحديد الفترة الزمنية الالزمة لعمل الجهاز. كيفية استخدام الحاضنة : 1 ثبت رفوف الحاضنة في أماكنها الصحيحة حسب ما تراه مناسبا لطبيعة العمل. 2 صل الحاضنة بالتيار الكهربائي, بعد التأكد من أن الحاضنة تعمل على جهد التيار نفسه المتوافر لمختبرك. 3 اضبط قرى التحكم في الحرارة حسب الحرارة المطلوبة. 4 شغل الجهاز بوضع مفتاح التشغيل على (ON), ثم راقب ثبات درجة الحرارة على ميزان الحرارة. 5 استخدام الحاضنة عند ثبات درجة الحرارة حسب الدرجة المثبتة على منظم الحرارة. كيفية العناية بالحاضنة : 1 نضف جسم الحاضنة من الداخل والخارج باستمرار, كي ال يتراكم الغبار عليها, ويمكنك استخدام الكحول )السبيرتو( األبيض في ذلك. 2 بعد زراعة البكتيريا والفطريات نظف الرفوف ثم جففها. 3 أجر فحصا دوريا لميزان الحرارة بمقارنته بميزان حرارة أخر تأكد من دقة تدريجه وجاهزيته. 4 جفف السوائل التي تنسكب على أرضية الجهاز مباشرة, وذلك حتى ال تتلف سلك التسخين. 5 اتبع الخطوات اآلتية في صيانة الجهاز إذا تعطل : أ تأكد من وصول التيار الكهربائي إلى المختبر. ب تأكد من أن القابس )الفيش( صالح. ج تأكدد مدن أن المنصدهر ) (Fuse غيدر معطدل بمشداهدة السدلك الرفيدع بداخلده والتأكدد مدن أنده غيدر مقطدوع, وفي حال تلف المنصهر استبدله بمنصهر أخر له نفس المقاومة. 31

33 جهاز الطرد المركزي ( النابذة ) CENTRIFUGE) (: يستخدم هذا الجهاز لفصل المواد عن بعضها, معتمدا في ذلك على قوة الطرد المركزية الناتجة عن الحركة الدائرية التي يدور فيها. استخدام النابذة : تستخدم النابذة في فصل : 1 مكونات الدم عن بعضها البعض )البالزما, كريات الدم الحمراء, كريات الدم البيضاء, الصفائح الدموية ). 2 الخاليا العالقة بالبول, كالخاليا الطالئية,وخاليا الدم, والطفيليات. 3 األمالح عن البول. 4 بعض المواد واألحياء العالقة بالماءكالطحالب, وبعض الكائنات الحية الدقيقة. أنواع المنابذ : المنابذ اليدوية : تعمل هذه المنابذ يدويا بإدارة المقبض, ويمكن أن تستوعب أنبوبين إلى أربعة أنابيب المنابذ الكهربائية : تعمل هذه المنابذ بالكهرباء وتستوعب )2 8( أنابيب وقد تستوعب أكثر من ذلك في األجهزة الحديثة ومن أشكالها : النابذة األفقية : يصمم رأس النابذة األفقية بحيث تتأرجح األنابيب المحمولة عليه حتى تصل إلى الوضع األفقي أثناء عملية الطرد المركزي انظر الشكل المجاور. النابذة المائلة : يصمم رأس النابذة المائلة بحيث توضع األنابيب فيه بشكل مائل بزاوية 454 تقريبا. 32

34 النابذة الكهربائية : تتركب من األجزاء الرئيسة اآلتية : 1 المحور المركزي )م( : يدور بسرعةكبيرة ويحمل الرأس. 2 الرأس )ر( : وظيفته حمل الدالء التي توضع فيها األنابيب وبالشكل المطلوب حسب نوع النابذة. 3 الدالء )د( : وظيفتها حمل األنابيب المحتوية على العينة وحفظها.4 4 ساعة التوقيت : تستخدم لتحديد الفترة الزمنية الالزمة للعمل, كما تعمل على إيقاف الجهاز تلقائيا عند انتهاء الزمن المحدد. 5 عداد الدورات : يحدد بوساطته عدد الدورات المطلوبة في الدقيقة. طريقة استخدام النابذة : 1 ضع العينة المراد ترسيبها في أنبوب اختبار مناسب للجهاز. 2 استخدم أنبوبا أخر من نوع األنبوب األول, وضع فيهكمية من الماء تساويكمية العينة في األنبوب األول. 3 ضع األنبوبين في دلوين متقابلينكما يظهر في الشكل المجاور. 4 أغلق الجهاز بغطائه الخاى. 5 حدد الفترة الزمنية الالزمة للترسيب باستخدام ساعة التوقيت. 6 حدد عدد الدورات الالزمة في الدقيقة باستخدام عداد الدورات. 7 صل الجهاز بالتيار الكهربائي بعد التأكد من أن يعمل على جهد التيار الكهربائي نفسه الموجود في مختبرك. 8 اضغط مفتاح التشغيل وانتظر إلى أن يتوقف الجهاز من الدوران وحده.)تعمل ساعة التوقيت في بعض األجهزة عمل مفتاح التشغيل ) 9 أخرج األنبوب المحتوي على العينة بعد أن يتوقف الجهاز عن العمل, واسكب ما فيه من سائل لتحصل على المادة المترسبة )الرائق( 11 أخرج األنبوب الثاني المحتوي على الماء من الجهاز. العناية بالجهاز : 1 ال تفتح غطاء النابذة إال بعد أن يتوقف الجهاز عن العمل تماما. 2 ال تحاول إيقاف النابذة أو إبطاءها باستخدام اليد, فذلك يتلف الجهاز فضال على أنه قد يؤدي إلى إصابتك باألذى. 3 افصل النابذة عن التيار الكهربائي بعدكل استخدام, ثم نظفها جيدا وغطها بغطائها البالستيكي الخاى. 4 ال تحاول تشغيل الجهاز قبل موازنة األنابيب. 33

35 جهاز معقم فرن الهواء الساخن :)Hotair sterilizer) تستخدم األفران التي تكون مجهزة بطريقة تسمح بتسخين الهواء إلى درجات حرارة مختلفة وعادة ما يستخدم هذا الجهاز في تعقيم األدوات التي ال تتأثر بالحرارة العالية مثل الزجاجيات بأنواعها, وعادة ما يتم التعقيم عند درجة حرارة تتراوح بين م لمدة تتراوح بين 1 3 ساعات حسب المواد المراد تعقيمها وال تستخدم هذه األفران لتعقيم البي ات الغذائية ألنها تجف بالحرارة. االحتياطات الواجب مراعاتها عند استخدام هذا الجهاز: عدم فتح الفرن وهو ساخن حيث أن ذلك يؤدي إلى تكسير األدوات الزجاجية, كما أن االنكماش السريع داخل الدوارق أثناء فتح الفرن قد يتسبب عنه دخول الهواء الملوث داخل الدوارق. الموصدة األوتوكدالف Autoclave( ) : جهاز يعمل بنظام التعقيم بالبخار تحت ضغط )الحرارة الرطبة Moist )heat قد تصل إلى 121 درجة م وية ويستخدم لتعقيم معظم البي ات المغذية التي تتحمل درجات الحرارة المرتفعة مثل بي ة اآلجار المغذي وأيضا الشاش والقماش والقطن والسدادات وكذلك للتخلص من المزارع الميكروبية منهاكمزارع البكتيريا المرضية المعدية. تركيب الجهاز : يتركب الجهاز من : 1 المرجل : وهو الجدار الخارجي للموصدة وهو جدار دائري سميك صلب من المعدن حتى يتحمل التسخين والضغط المرتفع للبخار الناتج من التسخين عند القيام بعمليات التعقيم. 2 السلة : وتكون مصنوعة من السلك أو الشبك أو معدن خفيف,وتوضع فيها المواد واألدوات المراد تعقيمها 34

36 3 الغطاء : يستخدم إلغالق الموصدة بإحكام, ويصنع من معدم المرجل نفسه وبالسمك ذاته ليتحمل ضغط البخار تحته. 4 مالزم الغطاء : تضمن إغالق الجهاز بإحكام وتمنع البخار من الخروج. 5 صمام األمان : يوضع في قمة المرجل فوق الغطاء, ويسمح للبخار باإلفالت بقدر معين عندما يصبح الضغط مرتفعا جدا مما يمنع انفجار الموصدة 6 مقياس الحرارة أو مقياس الضغط : يثبت على غطاء الموصدة ليبين مقدار الضغط أو درجة الحرارة أوكليهما. 7 سلك التيار الكهربائي : يستخدم التيار الكهربائي لتوليد الحرارة الالزمة لتبخير الماء في الموصدة. وفي بعض األجهزة التي ال توفر فيها ذلك )كطنجرة الضغط( يتم تسخينها على اللهب. 8 مفتاح التشغيل : يتوافر هذا المفتاح في األجهزة التي تعمل بالتيار الكهربائي. 9 ضابط التحكم في الحرارة : قرى دائري في أسفل الجدار الداخلي للموصدة ويستخدم للتحكم في درجة الحرارة الالزمة. خطوات التعقيم بالبخار: 1 تنظيف اآلالت وتجفيفها جيدا. 2 فك أو فتح اآلالت المفصلية ووضعها مفتوحة. 3 تغليف اآلالت والتي سيتم تخزينها بعد التعقيم وترقيمها وكتابة أنواعها. 5 ترتدب اآلالت فدي األوتدوكالف بطريقدة تسدمح بمدرور تيدار البخدار ووصدوله لكدل أجدزاء اآلالت مدع مراعداة سعة األوتوكالف. 1 يجب مراعاة تعليمات تشغيل الجهاز من المصنع بدقة مما يساعد على الحفاظ على الجهاز. 7 يبدددأ حسدداب الوقددت المطلددوب لتعقدديم عنددد وصددول درجددة الحددرارة للدرجددة المطلوبددة, وكددذلك الضددغط وليس قبل ذلك. 35

37 8 عنددد االنتهدداء مددن وقددت التعقدديم يتددرك الجهدداز حتددى يبددرد ويفددر البخددار عددن طريددق فددتح الصددمام الخدداى بذلك, ويترك الجهاز لمدة 3121 دقيقة ليبرد ثم يفتح الغطاء العلوي للسماح بخروج باقي البخار. 9 تترك اآلالت لتجف تماما قبل رفعها من الجهاز قدد يصدل الوقدت إلدى ( 31 (دقيقدة أخدرى وتعتبدر اآلالت واألدوات غير الجافة غير معقمه. 11 يتم تخزين اآلالت في مكان جاف بعيدا عن أي مصدر تلوث قدر اإلمكان. مالحظة: إن الغرض من التغليف قبل التعقديم هدو حمايدة اآلالت مدن األتربدة والجدراثيم أثنداء تخزينهدا بعدد التعقديم لحدين االسددتخدام. ويدددتم التغليددف إمدددا فددي قمددداش أو ورق مخصدددص لددذلك,أو فدددي أوعيددة معدنيدددة.وفددي حالدددة التغليدددف بالقماش فإن ذلك يتم بطريقة الظروف أو الحزمة. صيانة األوتوكالف : البد من عمل صيانة دوريه لألوتوكالف بواسطة مختص الصديانة, والتأكدد مدن أن مؤشدرات الحدرارة والضدغط تعمل بكفاءة االحتياطات الواجب مراعاتها عند استخدام جهاز األوتوكالف (Autoclave): احتواء الجهاز علىكمية مناسبة من الماء.. فتح الصمام الخاى بإخراج الهواء بعد بدء عمل الجهاز. يغلق بعد بدء ظهور البخار منه )وجود هواء داخل الجهاز يقلل كفاءة التعقيم( بعد انتهاء عملية التعقيم ال يفتح صمام إخراج الهواء قبل أن يبرد الجهاز حتى ال يدؤدي إلدى غليدان البي دة وتطاير السدادات القطنية ثم فشل عملية التعقيم. بعض المواد تحتاج لفترات زمنية أطول من تلك التي تستخدم عدادة فمدثال عندد تعقديم التربدة يراعدى عددم تعقيمكمياتكبيرة دفعة واحدة وتستخدم فترة زمنية قدرها )61( دقيقة. للدتخلص مدن المدزارع الميكروبيدة كمدزارع البكتيريدا المرضدية المعديدة يراعدى التعقديم فدي األوتدوكالف لمددة ( 15 _21 (دقيقه على درجة حرارة ) 121 (م. 36

38 الكلينوستات : االستخدام : لدراسة أثر الجاذبية األرضية على اتجاه الجذور النباتية ( االنتحاء األرضي ) التركيب : مفتاح التوقيت مفصل للتحريك قرى فليني غطاء بالستيكي حامل قاعدة تروس الحركة. طريقة العمل : 1 يوضع الجهاز بشكل رأسي, ثم تثبت بإدارة الفول على القرى الفليني بواسطة دبابيس مع مراعاة وضع الجذيرات بشكل أفقي ( عمودية على القرى الفليني ) 2 تغطى البادرات ماعدا الجذير بقطعة قطن مبللة بالماء, يبطن الغطاء البالستيكي بورق نشاف مبلل, ثم يغطى القرى بالغطاء البالستيكي. 3 يدار مفتاح الحركة ليدور القرى بانتظام يعمل الجهاز على إبطاء االنتحاء األرضي, حيث تنمو الجديرات في وضع أفقي. جهاز قياس النمو في النبات التركيب : حامل لوح معدني مدرج مؤشر بكرة خيط ثقل. االستخدام : تربط قمة النبات بواسطة الخيط, ويثبت عن طريق الثقل بحيث يعلو البكرة تؤخذ القراءة من المؤشر, ويترك بضعة أيام وتدون القراءة مرة أخرى. الفرق بين القراءتين يمثل مقدار نمو النبات خالل زمن معين. احتياطات عند االستخدام : 1 يراعى اختيار نبته من ذوات الفلقتين. 2 عدم ربط النبتة بقوة حتى ال تموت القمة النامية. 37

39 جهاز قياس النتح في النبات ( البوتوميتر( التركيب : لوح بالستيك أنبوبة شعرية مدرجة أنبوب مطاط مرن أنبوب مفتوح الطرفين سدادتان من البالستيك بثقب محقنه طبية مسطرة مدرجة. االستخدام: ثبت ساقا ذا أوراق في السدادة المطاطية. امآل األنبوب الشعري بالماء مع مراعاة سحب مكبس المحقنة الطبية لطرد الهواء, عند فقدان النبات للماء عن طريق ثغور األوراق فإن الماء يتراجع في األنبوب الشعري, يحسب حجم الماء في وحدة زمنية معنية, وتحسب مساحة األوراق, ويمكن حساب معدل امتصاى الماء) جم / سم 3 / ساعة ) احتياطات عند االستخدام : 1 تأكد من نظافة األنبوب الشعري. 2 تأكد من خلو األنابيب من الفقاعات الهوائية. 3 يتم قطع الساق تحت سطح الماء حتى ال تتكون فقاعات هوائية. جهاز التنافذ االنتشار الغشائي االستخدام: االنتشار الغشائيالخاصية االسموزيةأنواع األغشية التركيب: إناء زجاجي سعة 511 مل. غطاء من الخشب المضغوط لهذا اإلناء بوسطه فتحة صغيرة أنبوب زجاجي. ينفذ من الفتحة وينتهي في األسفل بقع شبيه بزهرة الحسك وفي األعلى ينثني. انثناء على شكل حرف U مسطرة مدرجة. 38

40 طريقة االستخدام : 1 يتم ربط األنبوب من جهة القمع بكيس من السلوفان بواسطة خيط. 2 يوضع باألنبوب محلول سكر, ويتم تلوينه بأي مادة ملونة ( برمنجات البوتاسي وم ) 3 يتم التحديد ثم وضع األنبوب في اإلناء بعد مل ه بالماء. 4 تتم مراقبة مستوى المحلول في األنبوب. احتياطات عند االستخدام : 1 يجب إحكام ربطكيس السلوفان بالقمع المتصل باألنبوب. 2 يمكن االستعاضة عن الخيط بشريط مطاطي. جهاز تقدير معدل التنفس ( جانوج ) االستخدام : يستخدم الجهاز في تقدير كمية األكسجين المستهلكة أثناء عملية التنفس وثاني أكسيد الكربون المتصاعد مما يمكننا من حساب معامل التنفس. التركيب: يتركب جهاز جانونج من جزء زجاجي منتفح يحوي فتحتين متقابلتين في فوهته وساقين زجاجيتين أحدهما مدرجة وذات سعة )111( بواسطة أنبوبة مطاطية آلية عمل جهاز جانونج : 3 سم ويتصالن معا 1 ضعي في الجزء المنتفح ورقة ترشيح صغيرة مبللة بالماء وحوالي 2 سم من البذور المستنبتة. 2 أدخلي محلولكلوريد الصوديوم من الطرف اآلخر واضبطي المستوى عند الصفر ( ثاني أكسيد الكربون ال يذوب في محلول كلوريد الصوديوم (. 3 قبل بدء التجربة, حركي غطاء الجزء المنتفح لكي يتقابل الثقبان, ويصبح حجم الهواء داخل الجهاز 3 )111( سم. 4 عندئذ أديري غطاء الجهاز لقطع االتصال بالهواء الخارجي بإغالق الثقبين. 5 تأكدي من أن مستوى المحلول ما زال مضبطا. 6 دعي التجربة تعمل لعدة ساعات والحظي مستوى المحلول وسجلي مشاهدتك. 39

41 7 أدخلي عدة بلورات من البوتاسا الكاوية من الطرف األنبوبي وبعد ذوبانها ستقوم بامتصاى ثاني أكسيد الكربون الناتج من عملية التنفس 8 قبل قياس حجم الغاز تأكدي من أن مستوى المحلول في األنبوبتين متساويتين 9 قارني بين مستوى المحلول في األنبوبتين وسجلي مشاهداتك مع األخذ في االعتبار نوعية البذور. المستخدمة جهاز قياس ضغط دم اإلنسان التركيب : صندوق معدني مستودع زئبق أنبوب مدرج أنابيب مطاطية سماعة طبيب كرة مطاطي لفاف من قماش مفتاح لخروج الهواء. طريقة االستخدام : 1 يتم فتح الصندوق المعدني بحيث يكون وضع األنبوب الزجاجي بشكل عمودي أو رأسي. 2 يفتح مستودع الزئبق, ثم يثبت اللفافة القماشية على الذراع األيسر للشخص المراد قياس ضغط دمه بحيث يكون قرى سماعة الطبيب تحت اللفافة مباشرة. 3 يقفل مفتاح خروج الهواء ثم يتم الضغط على الكرة المطاطية حتى يصل الزئبق إلى مستوى أعلى من المعدل الطبيعي لضغط اإلنسان. 4 قم بفتح مفتاح خروج الهواء مع مالحظة مستوى سطح الزئبق بالنسبة لتدريج األنبوب. 5 سجل القراءة عند سماع النبضات األولى )الضغط االنقباضي( ثم قم بتسجيل القراءة عند تالشي نبضات القلب )الضغط االنبساطي(. 40

42 ي جهاز تسجيل انقباض العضلة: التركيب : اسطوانة دائرية مثبتة على حامل تحتوي على ورقة مطلية بهباب الفحم. تثبت االسطوانة على جهاز تسجيل انقباض العضلة الذي يحتوي على محرك كهربائي يدور بسرعات مختلفة حسب الحاجة. مفتاح مثبت على جهاز انقباض العضلة للتشغيل. مفتاح آخر للتحكم بسرعة الجهاز. حامل مستقل يحتوي على ثقل للعضلة ورافعة ويتصل بسلكين من الكهرباء. يحتوي الحامل على مؤشر يالمس األسطوانة لتسجيل منحنيات للعضلة تختلف باختالف الثقل وسرعة الجهاز. جهاز تنبيهكهربائي. االستخدام : يستخدم في تسجيل انقباض العضالت المخططة وعضلة القلب في حيوان الضفدع. طريقة العمل : 2 1 يتم شل حركة الضفدع حتى تصبح غير قادرة على أي حركة إرادية. فصل وتر اخلس للعضلة البطن ساقية عن عظام القدم. 3 يتم ربط وتر اخلس بخيط من جهة وربط الطرف اآلخر للخيط بالرافعة الخاصة بالجهاز. 4 يثبت الطرف اآلخر للعضلة بتثبيت عظام الفخذ المتصلة بالعضلة بالقرب من الرافعة ثم إلى اسطوانة التسجيل العضلي. 5 يتم توصيل العضلة بجهاز التنبيه الكهربائي. 6 تشغل األسطوانة بأقصى سرعة مع تنبيه العضلة لنحصل على منحنى بياني النقباض العضلة 7 يتم مقارنة المنحنين المرسومين وتدوين المالحظات الخاصة بالتجربة. 41

43 الفصل الرابع مهارات أساسية للعمل في مختبر األحياء أوال : ثانيا : ثالثا : تحضير الصبغات والمحاليل. تحضير البي ات الخاصة لبعض الكائنات الدقيقة والحيوانات األولية. التحضيرات المجهرية. رابعا : التشريح. خامسا : حفظ العينات النباتية والحيوانية. 42

44 عملية الصبغ وطرق تحضير الصبغات والمحاليل عملية الصبغ وأهميتها : إن آلية الصبغ أو ما يسمى ( بدالتلوين ) تسدتخدم لتلدوين مكوندات الخاليدا أو األنسدددجة ممدددا يسدددهل تمييزهدددا عدددن بعضدددها وبالتدددالي يسدددهل دراسدددة األنسدددجة والخاليددا مجهريددا وكددذلك فددإن الصددبغ يسددتخدم ليزيددد وضددوح أجددزاء ومكونددات النسيج أو الخلية. تصنيف األصبا : يمكن تصنيف األصبا حسب مصدرها إلى نوعين رئيسين, هما : 1 األصبا الطبيعية وهي نوعان : األصبا ذات المصدر النباتي : كصبغة هيماتوكسلين. األصبا ذات المصدر الحيوي : كصبغة كارمن. 2 األصبا الصناعية )الكيميائية( تنتج هذه األصبا صناعيا وهي معتمدة على حلقة البنزين, ويمكن تقسيمها إلى : أصددبا حمضددية : وهددي التددي شددقها الحمددض هددو مددادة الصددبغ, كصددبغة األيسددوين, وتلددون هددذه األصددبا السيتوبالزم عادة باللون األحمر الفاتح. أصددبا قاعديددة : وهددي التددي شددقها القاعدددي هددو مددادة الصددبغ, كصددبغة أزرق الميثلددين وتلددون هددذه األصددبا النويات عادة باللون األزرق أو البنفسجي. أصددبا متعادلددة : وتنددتج فددي محاليددل مائيددة قاعديددة وحمضددية الصددبغة, وعددادة فددإن هددذه الصددبغة تددذوب فددي الكحول وال تذوب في الماء. ومن األمثلدة عليهدا صدبغة ليشدمان, وتلدون هدذه األصدبا الندواة والسديتوبالزم معا كال حسب تركيبه. 43

45 طرق الصبغ : 1 الصبغ التقدمي : تصبغ العينات النسيجية باستخدام هذه الطريقة بالتدرج, وكلما زادت مدة بقاء العيندة فدي الصددبغة زادت درجددة صددباغة األنسددجة. ويجددب فحددص الشددريحة بددين حددين وآخددر للتأكددد مددن إتمددام عمليددة الصبغ. ومثال ذلك )أصبا السيتوبالزم(. 2 الصددبغ التراجعددي : تصددبغ العينددات النسدديجية باسددتخدام هددذه الطريقددة بقدددر أكبددر مددن المطلددوب, ثددم يددتم الددتخلص مددن الكميددة الزائدددة مددنكميددة الصددبغ باسددتعمال عوامددل مميددزة. ومددن األمثلددة علددى ذلددك أصددبا النويددات, حيددث يسددتخدم الكحددول الحمضددي المكددون مددن ( %71( مددن الكحددول االيثيلددي مضددافا إليدده )%1 (من حمض الهيدروكلوريك المركز و) %5 (من حمض النيتريك المركز وذلك للدتخلص مدن صدبغة الهيماتوكسلين الزائدة. 3 الصددبغ المباشددر : ال تحتدداج هددذه العمليددة إلددى وسدديط مسدداعد فيوضددع النسدديج أو العينددة فددي مددادة الصددبغ لصباغتها. ومثال ذلك صبغة أزرق الميثلين وصبغة األيوسين. 4 الصدبغ الغيددر مباشددر : إن األصددبا المسدتخدمة فددي هدذه الطريقددة ال تصدبغ إال بوجددود وسدديط يسدمى مرشددح الصبغة. ويمكن استخدام المرشح والصبغة معا, ومثال ذلك صبغة )هيماتوكسيلين( فتضاف مدادة المرشدح )شب األمونيا( مع مادة الصبغة أثناء تحضيرها. ويمكن استخدام المرشح أوال ثم الصبغة بعد ذلك. 5 الصدددبغ الحيدددوي : وتسدددتخدم هدددذه الطريقدددة فدددي تلدددوين األنسدددجة والخاليدددا فددي الكدددائن الحدددي فتظهدددر بعدددض مكونات الخلية دون إحداث أي تلف تركيبي أو وظيفي في الخليفة. وتستخدم هذه الطريقة في الصبا لدلتالي: إعطاء فكرة جيدة عن التركيب الخلوي. إعطاء معلومات عن وظيفة الخليةكالنفاذية واالبتالع واإلخراج. المقارنة بين الخلية في األنسجة المقطوعة والمصبوغة. 44

46 أوال : تحضير الصبغات 1 صبغة رايت ( STAIN :)WRIGHTM'S 1,3 2.7 مل 111 مل التحضير األول : مسحوق رايت جليسرول كحول مثيلي إلى طريقة التحضير: يددددددذاب المحلددددددول جيدددددددا,ثددددددم يرشددددددح باسددددددتخدام ورق الترشدددددديح,ويحفددددددظ فددددددي عبددددددوة ذات لددددددون قدددددداتم ** وينصح بتحضيركمية تكفي ليوم واحد ** التحضير الثاني : يؤخددذ) 1.3 (جددم مددن المسددحوق التجدداري للصددبغة وتسددحق ثددم توضددع فددي) 31 (سددم 3 مددن الجلسددرين ثددم يوضدع المدزيج فدي ) 111 (سدم 3 األسديتون الخدالي مدن الكحدول المثيلدي. اتركدي المدزيج لمددة أسدبوع ثدم رشدحيه قبل االستعمال. وتستخدم هذه الصبغة لصبغ الدم. 2 صبغة ليشمان: طريقة التحضير: يذاب ) 1.5 (جرام مسحوق صبغة ليشمان في )1( لتركحول ايثيليكآالتي: يوضع) 1.5 (جم من الصبغة في هاون وتسحق مع إضافة قليل من الكحول مع استمرار السدحق واسدتمرار إضافة الكحول تدريجيا حتى الذوبان الكامل. ترشح ويفضل عدم استخدام الصبغة أال بعد أسبوع من تحضيرها. 3 صبغة المثيل البرتقالي: طريقة التحضير يذاب )1.4 (جم من المادة في )61( سم 3 من الكحول النقي ثم يخفف بالماء المقطر إلى )251 (سم 3. 45

47 4 صبغة أزرق الميثلين: وهددي صددبغة قاعديددة وزنهددا الجزي ددي )319( تددذوب فددي المدداء والكحددول وتسددتعمل لصددبغ مددادة الكددالوز فددي العناصر الغربالية لنسيج اللحاء. طريقة التحضير: 1 يذاب )1( جم من مسحوق صبغة ازرق المثيلين في ( 111( ملكحول ايثيلي تركيزه ) 95 (. 2 يضاف إليها )111( مل من الماء المقطر. 5 صبغة جرام اليودي: طريقة التحضير: يددذاب )21( جددم مددن يوديددد البوتاسدديوم فددي ( 31( سددم 3 مدداء مقطددر ثددم يددذاب )12.7 ) جددم يددود نقددي ويكمل المحلول بإضافة الماء المقطر إلى حجم لتر باستخدام دورق عياري. :SUDAN III ) C22 H16 O N4 ) ( 6 صبغة سودان )3 هددي صدبغة حامضددية ضددعيفة وزنهددا الجزي ددي )352( تددذوب فددي الكحددول االيثيلددي وتسددتعمل لصددبغ جميددع المددواد الدهنيدة فدي الخاليدا النباتيدة والقندوات الراتنجيدة واللدبن النبداتي والبالسدتيدات الخضدراء ومثلهدا صدبغة سدودان )4( ) 4 (C 24 H 20 O N ولكنها ذات وزن جزي ي مختلف هو) 381 (. طريقة التحضير: 1 يذاب )5( جم من صبغة سودان )3 ) في )111( مل منكحول ايثيلي تركيز ) 71( 2 في حالة سودان )4( يذاب ( 5( جم من الصبغة في )95 ) مل من الكحول االيثيلي تركيز ) 71 ) 3 تترك العينات في الصبغة لمدة تتراوح بين )1511 ) دقيقة. طريقة أخرى : يضاف ) 1.5 (جرام من المادة سودان )3( لكل )111( مل من حامض الخليك الثلجي الخالي من الماء. 46

48 7 صبغة أسيتوكارمن: المواد المستخدمة وكمياتها: جرام بودرة الكارمين. مل حامض الخليك الثلجي. مل ماء مقطر. )1( )45( )55( طريقة التحضير: ذوب ) 1 (جرام من بودرة الكارمين في حامض الخليك الثلجي. أضف الماء المقطر إليه وسخن المحلول. اتركه حتى يبرد ثم قم بتصفيته وأضف إليه نقطتين من كلوريد الحديديك قبل استعماله. 8 صبغة الصفرانين: أ محلول التخزين المواد المستخدمة : )2.5( جم صفرانين إلى )111( مل إيثانول 95( )% ب محلول الصبغ المواد المستخدمة : ( 11 ) مل محلول التخزين ( 91 ) مل ماء مقطر 9 كلوريد الخارصين اليودي : طريقة التحضير: تحضر الصبغة بمزج هذه المواد : )3( جمكلوريد الزنك )5( جم يوديد البوتاسيوم )1( جم يود في )14( مل ماء مقطر 47

49 جدول يوضح أهم الصبغات المستعملة في الشرائح وأثرها م اسم الصبغة سليلوز لجنين الخشب كيوتين قشرة سوبرين فاين مواد بروتوبالزم النشا دهنية 1 محلول اليود بني بني بني أصفر أزرق قاتم كلوريد الخارصين بنفسجي بني بني بني أصفر اليودي 2 3 كبريتات اإليثلين أصفر 4 إيثلين أزرق أزرق أزرق 5 سودان 3 أحمر أحمر أحمر 6 صفرانين أحمر 7 أخضر ضوئي أخضر أخضر 48

50 الفترة الزمنية لصالحية محاليل الصبغ الصالحية محلول رئيسي : 86 شهور محلول عملي : أسبوعان محلول رئيسي : 4 شهور محلول رئيسي : 6 شهور محلول عملي :24 ساعة ويطرح بعد االستخدام 3 شهور 3 شهور شهرين, يطرح المحلول بعد االستخدام شهر, يطرح المحلول بعد االستخدام لمرة واحدة شهران شهرين 6 شهور محلول الصبغ هيماتوكسلين ايوسينكحولي بوراكس أزرق الميثلين الميثيل البرتقالي يود غرام الفوكسين القاعدي ليشمان أزرق األنلين الفوكسين الحمضي %1 أسود سودان ب سنة واحدة 6 شهور, يستخدم المحلول لمرة واحدة 6 شهور, يستخدم المحلول لمرة واحدة من أشهر وحتى سنوات حمض الخليك الثلجي %3 محلول الفورمالين %11 المحاليل المنظمة 49

51 ط قر ثانيا : تحضير بعض المحاليل الكاشفة الكواشف : هدي مدواد تسدتخدم لكشدف الوسدط الدذي يدتم فيده التعامدل مدع العيندة أو أي سدائل بحيدث يدتم تغييدر الوسدط سواء تغيركيميائي أو فيزيائي ومن هذه الكواشف ما يلي: 1 محلول هيدروكسيد الصوديوم )ماء الجير (: يشددبع المدداء بهيدروكسدديد الكالسدديوم ثددم يرشددح ويحفددظ فددي زجاجددات محكمددة اإلغددالق مددع دهددان الغطدداء بطبقة من الفازلين. 2 محلول بندكت reagent) (Benedicts الطريقة األولى : يمكن شراءه أو تحضيره بتسخين )3 17( جم من سترات الصوديوم و) 111 ( جم منكربوندات الصدوديوم الالمائية في )811( مل مياه مقطرة بعد ذلك ترشح وتخفف إلى )851( مل. فيكأس مدرج آخر قم بإذابة )3 17( جم من بلورات (CuSO4( في )111( مل ميداه مقطدرة ثدم أضدف هذا المحلول إلى المحلول األول وقم بالتحريك وأضف مياه مقطرة ليصبح الحجم النهائي )1( لتر. الثانية: الطريقة )3 17( جرام سترات الصوديوم. )7 1( جرامكبريتات نحاس مائية. المواد المستخدمة وكمياتها: جرامكربونات الصوديوم المائية. )11( )211( مل ماء مقطر. كاس زجاج عدد) 2 ( طريقة التحضير: ذوبكربونات الصوديوم المائية وسترات الصوديوم في )111( مل ماء مقطر في الكأس األول. ذوبكبريتات نحاس ال مائية في )111( مل ماء مقطر في الكأس الثاني. أخلط المحلول األول مع المحلول الثاني مع التسخين حتى يذوب ثم قم بتصفيته وحفظه. 50

52 3 محلول بيورت ( كاشف بيوريه )) solution (Biuret يمكن شراءه أو تحضيره بإذابة )3( جم منكبريتات النحاس و )12( جم ترتارات الصوديوم والبوتاسيوم في )111( مدددل ميددداه مقطدددرة ثدددم أضدددف علدددى مهدددل )611( مدددل )11 % ) هيدروكسددديد الصدددوديوم مدددع التحريدددك المستمر )يعاير باستخدام الحامض( مالحظة : أثناء تحضير هذا المحلول استخدام واقي للوجه وكفين لليدين. 4 محلول لوغول: المواد المستخدمة وكمياتها : )11( جرام يوديد البوتاسيوم )5( جرام يود صلب )111( مل ماء مقطر طريقة التحضير: جم من يوديد البوتاسيوم مع 5 جم من اليود الصلب في 111 مل من الماء المقطر. ذوب 11 5 محلول رنجر: المواد المستخدمة وكمياتها: )6 1 (جرامكلوريد الصوديوم. 142( )1 جرامكلوريد البوتاسيوم. 142( )1 جرامكلوريد الكالسيوم. )11 1( جرام بيكربونات الصوديوم. )111( مل ماء مقطر. كأس زجاج. طريقة التحضير: أخلط جميع المواد المذكورة أعاله مع التحريك بواسطة قضيب زجاج. 51

53 6 محلول اليود المواد المستخدمة : يوديد بوتاسيوم )3( جم ماء مقطر 25( ) مل يود صلب 6( )1 جم طريقة التحضير: يذاب ( 3 جم( من يوديد البوتاسيوم في) 25( مل ماء مقطر ثم يضاف )6 1( جم من اليود النقي وحرك حتى الذوبان ويكمل بالماء المقطر الى )211( 7 محلول فهلنج أ مل مع التحريك ويخزن في زجاجات معتمة. يدذاب) 6 34( جدم مدنكبريتدات النحداس فدي )511 ) سدم 3 مداء ويوضع المحلول في زجاجة حفظ محاليل ويكتب عليها )) فهلنج أ ((. 8 محلول فهلنج ب )511( مالحظة: يذاب ( 173 مقطدر باسدتخدام دورق عيداري المقطدر ) جم من ملح روشيل "ت ت رارات صوديوم بوتاسيوم "مع )52 ) جدم هيدروكسديد صدوديوم فدي سم 3 ماء مقطر ويوضع المحلول في زجاجة حفظ محاليل ويكتب عليها )فهلنج ب(. يحفظ محلولي فهلنج ( أ ) و) ب( في زجاجات مستقلة وعند االستعمال يؤخذ حجمان متساويان من كل منهما ويخلطان. 9 ورقكلوريد الكوبالت المواد المستخدمة وكمياتها: محلولكلوريد الكوبالت. ورق ترشيح. مصدر لهب. طريقة التحضير: نغمس ورقة الترشيح بالكامل في محلول كلوريد الكوبالت فتتلون الورقة باللون الوردي. نجفف ورقة الترشيح ونعرضها لمصدر لهب إلى أن تتلون باللون األزرق لتصبح جاهزة لالستخدام. 52

54 ط قر تحضير بعض المحاليل المثبتة: التثبيت : هو العملية التي يتم فصل وقتل األنسجة وحفظها قدر اإلمكان على الحالة التيكان عليها أثناء الحياة. أهمية عملية التثبيت : تكسب العينة قدر من الصالبة. حفظ التراكيب في حالة مشابهة لحالتها األصلية تمنع عملية التحلل البكتيري والذاتي للنسيج. العوامل المؤثرة على عملية التثبيت : 1 تركيز المثبت وجودته. 2 حجم العينة. 3 سرعة نقل العينة إلى المثبت. 4 مدة التثبيت. 5 درجة الحرارة. 6 االسموزية. من محاليل التثبيت : 1 محلول بوان المواد المستخدمة وكمياتها: )75( مل حمض بكريك ( محلول مائي مشبع ) )21( مل 5( ) مل فورمالين )%41( حمض خليك ثلجي طريقة التحضير: تخلط المواد ببعضها ويحفظ المحلول في زجاجات وتكون جاهزة لالستخدام. 53

55 2 زنكر محلول المواد المستخدمة وكمياتها: )5( مل كلوريد زئبق ( محلول مشبع ) 5( )2 مل )1( مل )111( مل بيكربونات بوتاسيوم كبريتات الصوديوم ماء مقطر طريقة التحضير: تخلط المواد ببعضها وتستخدمكمحلول مثبت لألنسجة, وهو مادة حافظة للكائنات البحرية الصغيرة. 3 الفورمالين محلول الفورمالين يستخدم بمفرده كمثبت بتركيز )%5( أو مع غيره من المثبتات المركبة مثل :محلول الفورمالين الكحولي ) 4 محلول الفورمالين الكحولي ( مثبت FAA المواد المستخدمة وكمياتها: )91( ملكحول ايثيلي مطلق تركيزه )%51( أو )71 %( )5( مل فورمالين %41( ) )5( مل حمض خليك ثلجي. طريقة التحضير: تمزج هذه المواد مع ببعضها ويحفظ المحلول في زجاجة. 54

56 التحميل و أوساطه: تعريف التحميل : هو الوسط الذي يحفظ فيه التحضير كمرحله نهائية بعد عملية الصبغ. أوساط التحميل عديدة و لكن يمكن تقسيمها إلى نوعين : 1 أحدهما يمتزج بالماء, و في هذه الحالة فإن إزالة الماء من القطاعات أو العينات ليست ضرورية. 2 و اآلخر أوساط ال تمتزج مع الماء, وفي هذه الحالة يجب إزالة الماء من القطاعات ( العينات ) قبل مرحلة التحميل بهذه األوساط. أوال : العوامل التي يجب توفرها في وسط التحميل : 1 أن يكون معامل انكساره قريبا من معامل انكسار الزجاج. 2 أن يكون قابال لالمتزاج مع وسط الترويق. 3 أن ال يتفاعل مع مكونات النسيج أو الصبغة. 4 أن ال يسبب تشويها لتراكيب العينة المصبوغة. أن ال يضيف تراكيب اصطناعية إلى العينة. عدم إزالة لون الصبغة أن ال يتشقق أو يأخذ شكال حبيبيا عند الجفاف. 8 أن ال ينصهر بالحرارة الناتجة أثناء الفحص تحت المجهر. 55

57 ثانيا : أوساط التحميل : هناك نوعين من أوساط التحميل هما : ( أ ) أوساط التحميل المؤقت : : ) وهي التي تستخدم لتحميل التحضيرات المؤقتة, أو أنها تذيب بعض مكونات العينة, و منها : water 1 الماء ( يمكن و ضع قطرة من الماء على القطاع أو العينة المفحوصة و تغطيتها بغطاء الشريحة, و بما أن الماء شفافا فإنه يسمح برؤية جيدة للعينة عند الفحص, و لكن الماء سريع التبخر و لذا تجف العينة أنه ال يمكن من استعمال العدسة الزيتية. : ) 2 الجليسرين ( glycerin الجليسرين يعتبر و سطا جيدا المؤقت, و معامل انكساره ( ضعت مادة صمغية على حواف غطاء الشريحة لمنع تبخر لفترة طويلة هالم الجليسرين ( jelly ) glycerin : وهو وسط جيد للتحميل المؤقت, و معامل انكسار )47 الجليسرين 1 ) تقريبا, كما أنه إذا و, فإن التحضير قد يبقى بسرعة, كما ) تقريبا لكنه يعمل على شحوب الصبغة, و يظل مما يعرض العينة للتلف بسهولة و تحرك غطاء الشريحة عند أي إمالة للشريحة بمادة صمغية فإن التحضير يظل لوقت طويل دون ضرر, وهو يباع جاهز التحضير. : ) permanent mounting media ( ب ) أوساط التحميل المستديم ( وجد أنواع عديدة من أوساط التحميل المستديم, و هي مواد عضوية أغلبها صمو, إما طبيعية أو مصنعة, ومن أهمها كندا بلسم ( balsam ) Canada و )كالرايتclarite ( ووسط دي. بي. إكس (. ) d.p.x 56

58 1 كندا بلسم ) balsam ) Canada : يعتبركندا بلسم وسطا شائع االستعمال لتثبيت أغطية الشرائح على العينات, وهو مادة طبيعية تستخرج من سيقان نبات البلسم ) mea ) albies balsa, معامل انكساره )1,52 ) قريب جدا من معامل انكسار الزجاج, كما أنه شفاف ويذوب في الزايلين, كما أنه يجف دون تكوين شقوق أو شكل حبيبي, و لكنه يعمل على شكل شحوب الصبغات ويسود مع الزمن, و يمكن الحصول عليه جاهزا لالستخدام و يمكن تحضيره بالمعملكما يلي : 1 يذابكندا بلسم ( الصمغ الطبيعي ) بالزايلين بنسبة )%61( 2 يسخن الخليط بوضعه في فرن الشمع. 3 يرشح الخليط بعد تمام إذابة الصمغ. 4 يضافكمية قليلة منكربونات الكالسيوم لجعل وسط البلسم متعادل. 5 يحفظ بقنينة داكنة و محكمة الغطاء لحين وقت االستعمال. 2 يوبرال ( euparal ( : وسط تحميل جيد معامل انكساره )48 1( تقريبا, ويتكون أساسا من )eucalyptol( و بارالدهايد ( )paraldehyde, باإلضافة إلى مواد أخرى, وهو يجف بسرعة, ونظرا النخفاض معامل انكساره فإنه يعمل على ترويق العينات غير المصبوغة فتظهر بوضوح عند الفحص, و لصعوبة تحضيره فإنه غالبا ما يحصل عليه جاهز التحضير من الشركات المنتجة. 3 وسط دي. بي. إكس ( d.p.x ) : يتكون هذا الوسط ( d.p.x ) من ثالث مواد هي: دسترين ( distrene ) و بالستسيزر ( plasticizer ) وزايلين ( xylene ), ومعامل انكساره 52(,)1 وهو وسط جيد للتحميل حيث يجف بسرعة و شفاف و ال يعمل على شحوب الصبغة ( الحاج 1982 م ). 57

59 حتضري البيئات اخلاصة ببعض الكائنات الدقيقة واحليوانات األولية 58

60 : تحضير البي ات أوال : تحضير بي ة مائية خاصة بتكاثر البراميسيوم )التكاثر باالنشطار الثنائي( ثانيا : تحضير بي ة مائية خاصة بتكاثر األميبا ثالثا : تحضير بي ة خاصة لتكاثر الخميرة )التكاثر بالتبرعم ) الخاصة بنمو وتكاثر بعض الحيوانات األولية والكائنات الدقيقة خذيكأسا زجاجيا و أملئ ثلثيه بالماء, أضيفي إليه مسحوق أوراق نباتية فيها أثار تربة ( يفضل النجيل ) و اتركي الكأس في غرفة داف ة لمدة أسبوع لتتكاثر فيها البراميسيوم. و للتعرف على التكاثر باالقتران في البراميسيوم يؤخذ ماء من مستنقع و يوضع في وعاء و اتركه في المعمل لمدة أسبوع. أحضري قطرات من مياه راكدة على أن تؤخذ بالقرب من القاع ثم أضيفي لها من حبات القمح و أملئ الطبق إلى النصف بماء البركة و اتركيها عدة أيام لتتكاثر فيها األميبا تخلط قطعة صغيرة من الخميرة مع ملعقة صغيرة من السكر في وعاء زجاجي, يضاف لها 21 مللتر من الماء و يحرك المزيج جيدا و يترك لمدة يومين. رابعا : تحضير بي ة خاصة لتكاثر عفن الخبز) التكاثر باألبوا ) توضع قطعة من الخبز في طبق بتري و يضاف لها 11 مليلترات من الماء, و تحفظ في مكان مظلم و دافئ لمدة أسبوع. 59

61 زراعة البكتيريا )Culture) المنابت ( أنواعها وكيفية تحضيرها( تعريف المنابت : هددي األوسدداط التددي تحتددوي علددى بي ددة مناسددبة مددن الممكددن أن تعدديش عليها الكائنات الحية الدقيقة بحيث تنمو وتتكاثر. أهمية المنابت : 1 حفظ المزارع البكتيرية وتكاثرها. 2 دراسة مدى تأثير الكائنات الحية الدقيقة في إحدى المواد الغذائية. 3 توفير الظروف البي ية المناسبة للكائنات الحية الدقيقة لتكوين ناتج معين أو مجموعة من النواتج. أنواع المنابت : أوال : المنابت الطبيعية : 1 المنابت الطبيعية: هي المنابت التي يمكن تحضيرها من مواد موجودة في الطبيعة. ومن األمثلة عليها: مصل الدم المعقم المحتوي على قطع معقمة من الكبد. مح البيض أو قطع من البطاطا. " كيفية تحضير مستنبت طبيعي من قطع البطاطا : اغسدددددل أطبددددداق بتدددددري وأغطيتهدددددا وجففهدددددا جيددددددا بوضدددددعها داخدددددل المجفدددددف Oven( ) فتدددددرة مدددددن الوقدددددت, إذاكانت من النوع الزجاجي الذي يسدتخدم أكثدر مدن مدرة, أمدا الندوع البالسدتيكي فدال يحتداج إلدى ذلدك حيدث يستخدم مرة واحدة فقط. قطع البطاطا بعد تقشيرها إلى شرائح دائرية بسمك ( 86 ملم(,واغسلها جيدا بالماء. 60

62 اسددددددددتخدم ملقطددددددددا فددددددددي نقددددددددل شددددددددرائح البطاطددددددددا إلددددددددى أطبدددددددداق بتددددددددري, ثددددددددم غددددددددط األطبدددددددداق بأغطيتهددددددددا, ولدددددددددددف الطبدددددددددددق مدددددددددددع غطائددددددددددده بدددددددددددورق قصددددددددددددير وضدددددددددددعها فدددددددددددي جهددددددددددداز الموصددددددددددددة) Autoclave ( في درجة حرارة تتراوح ما بين ) درجة سيلزيوزية( مدة ساعة. ثانيا : المنابت الصناعية المنابددت الصددناعية: هددي المنابددت التددي يددتم تحضدديرها مددن مجموعددة مدددن المواد المختلفة, وتنقسم إلى: أ منابدددت سدددائلة : ومدددن األمثلدددة عليهدددا المدددرق المغدددذي, وهدددو محلدددول مدددائي يحتوي على )5 1 %( من الببتون و )3 %1( من مستخلص اللحم. ب منابت صلبة : ومن األمثلة عليها منابت السيليكا. ج منابدت صدلبة قابلدة ل سدالة: هدي المنابدت التدي تكدون غالبدا صدلبة فدي درجدة حدرارة الغرفدة )3121 درجدة سيلزيوزية( ويمكن إذابتها بالتسخين, ومنها اآلجار ( )Agar كيفية تحضير منابت اآلجار : 61 أ أحضدر دورقدا زجاجيدا مخروطدي الشدكل سدعة )251( مدل, واغسدله جيددا ثدم جففه باستخدام المجفف. ب ضع في الدورق المواد اآلتية: بودرة اآلجار...) 1.5 جرام( سكر سكروز...) 2 جرام( خالصة اللحم...) 2 جرام( أكمل الكمية إلى )111( مل من الماء المقطر. ج سخن المزيج جيدا إلى أن تذوب مادة اآلجار, ثم أغلق الدورق جيدا بغطاء مناسب. د عقم المزيج واألدوات المستخدمة في عملية الزراعةكما يأتي: غلف الدورق وأطباق بتري واألدوات الالزمة لعملية الزراعة بورق القصديركال على حدة. ضعكميةكافية من الماء ال تقل عن )611( مل في جهاز المعقم).)Autoclave

63 ضع الدورق وأطباق بتري واألدوات في سلة الجهاز, ومن ثم ضع السلة داخل الجهاز. أغلق الجهاز جيدا وصله بالتيار الكهربائي أو ضعه على مصدر حدراري ( إذاكدان مدن الندوع الدذي ال يعمدل بالكهرباء(, واتركه مدة )21( دقيقة بعد أن يتصاعد منه البخار. اترك الجهاز بعد ذلك فترة من الزمن ليبرد ثم أخرج المحتويات منه. هد ضع أطباق بتري على سطح مسدتو, واسدكب فيهداكميدة مناسدبة مدن المدزيج مباشدرة بعد إخراجه من جهاز الموصدة )Autoclave( ( مستخدما ماصة معقمة بطريقدة السدحب باالنتفداخ المطداطي ال بدالفم( ويدتم ذلدك برفدع غطداء الطبدق ثدم إعدادة إغالقده مباشدرة, وتركده جانبدا ليبرد ويتجمد في درجة حرارة )41( درجة سيلزيوزية. وتعد هذه المنابت من أكثر المنابت استخداما في المختبرات المدرسية. : مالحظة )note( ال تفتح أطباق البتري المحتوية على بي دة اآلجدار المحضدرة إال فدي لحظدة الزراعدة, وذلدك برفدع الغطداء مسدافة قريبة جدا وبالقرب من لهب بنسن. تعقدددم أطبددداق بتدددري المحتويدددة علدددى بي دددة اآلجدددار بتغليفهدددا بدددورق القصددددير ووضدددعها داخدددل جهددداز الموصددددة )Autoclave( وتشغيله. مواد بديلة : إذا لدم تتدوفر خالصدة لحدم جداهزة تحضدر خالصدة اللحدم بغلدي قطعدة صدغيرة مدن لحدم البقدر الصدافي فدي المداء ساعات عدة حتى يتبخر القسم األكبر من الماء, وتستخدم الخالصة ( الرخوة المتبقية(. من الممكن استخدام بدائل أخرى عن اآلجار مثل : gelatin Davis agar agar powder *جالتين دايفس *جلي أجار آجار 62

64 ) دراسة الصفات المزرعية للبكتيريا characteristics) Bacterial cultural الهدف: دراسة أشكال ومظاهر النمو المختلفة للبكتيريا على مختلف األوساط الغذائية. تعتبر من أهم الدراسات لتعريف وتصنيف البكتيريا. تعطي وصف دقيق للبكتيريا أثناء نموها على األوساط الصلبة والسائلة. أوال : وصف النمو البكتيري على البي ات الصلبة في الشكل أطباق بتري media) )Solid 1 شكل المستعمرة form( :)Colony ومن أهم األشكال نقطيةدائرية خيطية جذرية غير منتظمة مغزليه 2 ارتفاع المستعمرة : Colony elevation مسطحةمرتفعة محدبةكثيرة التحدب مرتفعة المركز 3 شكل حافة المستعمرة margin) (: Colony كاملة مموجة مفصصه مسننة خيطية مجعدة 4 سطح المستعمرة surface) :)Colony ناعم خشن 63

65 5 الصفات الضوئية للمستعمرة Colon) :) optics معتمة شبه شفافة شفافة 6 حجم المستعمرة size( )Colony 7 لون المستعمرة)إنتاج الصبغات( :) Pigmentation) ملونة غير ملونة 8 الرائحة :)Odor) متعفنة عطرية بدون رائحة 9 قوام المستعمرة ) consistency :)Colony غشائي لزج )مخاطي( زبدي هش 11 التأثير في الدم activity( :) Hemolytic تحلل الدم تحليلكامل hemolysis( ) Beta تحلل الدم جزئيا( hemolysis ) Alpha ال تحلل الدم hemolysis) or non )Gamma hemolysis 64

66 ثانيا: مظاهر النمو البكتيري على أنبوبة اآلجار المائل الشكل )Nutrient agar slant) ) Growth amount 1 كمية النمو ( ال يوجد نمو قليل متوسط غزير 2 اللون على النمو نفسه منتشر في البي ة 3 الصفات الضوئية والشفافية 4 شكل النمو خيطي منتظم مسنن سبحي منتشر متفرع ثالثا: وصف النمو البكتيري في البي ات السائلة الشكل )Liquid media) 1 كمية النمو amount) )Growth ض يل متوسط غزير 2 شكل النمو) )Growth form خيطي مسنن خرزي منتشر جذري شجري 3 النمو على السطح : ال يوجد حلقي رقيق غشائي صوفاني 4 النمو تحت السطح : ال يوجد عكر حبيبي صوفاني قشاري 5 النمو المترسب : ال يوجد حبيبي صوفاني قشاري لزج جليدي 65

67 الطرق المختلفة لزراعة األنواع البكتيرية يمكن زراعة البكتيريا بعدة طرق: البي ة السائلة. االجار المائل. االجار العميق. الزراعة السطحية على بي ة اجار مغذي plate) )Surface الزراعة العميقة على بي ة االجار المغذي ( plate ) Pour دراسة الصفات الشكلية للخاليا البكتيرية Studies) )Morphological )صبغ الخاليا البكتيرية Staining) (: Bacterial الصبغ هو دراسة مورفولوجية يقصد بها دراسة شكل الخلية البكتيري. تحضير الغشاء البكتيري preparation( )Smear حتى نتمكن من فحص الخاليا البكتيرية ودراسة أشكالها البد من تحضير الغشاء البكتيري smear) )bacterial ثم تتبعها عملية الصبغ والفحص تحت الميكروسكوب باستخدام العدسة الزيتية. وعند تحضير أي غشاء بكتيري تتبع الطرق التالية: 1 عقمي إبرة التلقيح المعدنية بتمريرها على لهب موقد بنزن حتى االحمرار ثم تركها حتى تبرد. 2 بواسطة إبرة التلقيح ضعي قطرة من الماء المعقم في مركز شريحة زجاجية نظيفة ثم عقمي اإلبرة مرة أخرى واتركيها حتى تبرد. 3 انقلي قليال من النمو البكتيري بواسطة إبرة التلقيح المعقمة إلى الشريحة ثم اخلطيها مع الماء حتى تتكون عكارة خفيفة ثم انشريها حتى يتكون غشاء رقيق منتظم ثم اتركيه يجف في الهواء )أو جففيه على ارتفاع )15( سم فوق اللهب( 4 ثبتي الغشاء البكتيري بتمرير الشريحة على اللهب من )3( إلى )4( مرات وبعد هذه المرحلة يكون الغشاء البكتيري جاهزا للصبغ. 66

68 الصبغ المركب صبغ جرام :( Stain (Gram في الصبغ المركب يتم صبغ الخاليا البكتيرية بأكثر من صبغة, ومن أشهرها صبغة جرام وسميت بذلك نسبة إلى العالم الدانماركي كريستيان جرام الذي ابتدعها عام 1884 م. وقد أمكن بواسطتها تقسيم البكتيريا بناء على استجابتها للصبغ إلى : بكتيريا موجبة لجرام bacteria( Gram positive (تتلون باللون البنفسجي. مثال:بكتيريا ( staph )aureus بكتيريا سالبة لجرام bacteria( ) Gram negative تتلون باللون األحمر. مثال: بكتيريا) )E.coil طريقة عمل صبغ جرام 1 حضر الغشاء البكتيريكما تعلمت 2 ضع نقاطا من صبغة الكريستال البنفسجية violet( ) crystal لمدة دقيقة. 3 تزال الصبغة تحت تيار مائي خفيف. 4 ضع نقاطا من محلول اليود لمدة دقيقة ثم اغسل الشريحة تحت تيار مائي خفيف. 5 ضع نقاطا من الكحول االيثيلي لمدة )11( ثواني تقريبا ثم اغسل تحت تيار مائي خفيف. 6 ضع نقاطا من صبغة السفرانين لمدة دقيقة إلى دقيقتين ثم اغسل تحت تيار مائي خفيف. 7 جفف الشريحة بين ورقتي ترشيح ثم افحصها بالعدسة الزيتية. 8 حدد نوع البكتيريا من حيث استجابتها لجرام وأشكالها وانتظامها. ( يكون اليود مع صبغة الكريستال البنفسجي معقد قابل للذوبان بالكحول ) 67

69 طرق الحصول على اآلجار ( لزراعة فطر عفن الخبز( أوال: من البطاطس يمكن الحصول على آجار الدكستروز والبطاطس بالخطوات التالية : 1 قشر ثم قطعكمية من البطاطس البيضاء,ثم اغلها مدة ساعة واحدة في )351( مل من الماء المقطر. 2 رشح من خالل شاش ثم أعد السائل إلى الحجم ) 351 (مل بإضافة مزيد من الماء المقطر وإلى ذلك الحجم من السائل أضف )1( جم من الدكستروز و) 11 ( جم من اآلجار. 3 اغل الخليط لمدة نصف ساعة في غالية مزدوجة. 4 رشح الناتج ثم عقم وأخيرا صب السائل في أوعية صغيرة ومعقمة. 5 طعم ما ترغب من عينات العفن للحصول على مزرعة نقية. مالحظة : يمكن تحضير وسط من بطاطس آجار بدون دكستروز ثانيا: من روث الحيوانات 1 انقع روث حيوان )211( جم في الماء لمدة) 3 ( أيام. 2 خذ السائل وخففه بماء حتى يتحول لونه إلى األصفر. 3 أضف إليه اآلجار بمعدل )5 2 (جم لكل ) 111 (سم 3 من السائل. 4 أغلق الكل وصبه في أواني معقمة. 68

70 التحضريات اجملهرية 69

71 حتضري الشرائح اجملهرية تعريف التحضيرات المجهرية: يقصد بالتحضيرات المجهرية بأنها تلك الخطوات أو العمليات التي تسدتعمل فيهدا معددات أو أجهدزة علميدة وطدرق تحضدير دقيقدة تسدهل علدى الددارس معرفدة ماهيدة التراكيدب الخلويدة لجسدم الكدائن الحدي وطريقدة الحصدول على العينة. الهدف من تحضير الشرائح المجهرية: لدراسة التركيب الداخلي أو الخارجي في بعض الكائنات الحية أو جزء منها والتعرف على خصائصها وصفاتها. أهمية التحضيرات المجهرية: إن عملية التحضيرات المجهرية رغم أنها غاية في التعقيد والدقة إال أنها ذات أهمية كبيرة في الحياة العملية والبحثية والتشخيصية,فهي تعتبر األساس األول لتشخيص المرض بواسطتها يمكن دراسة التراكيب الخلوية المكونة لجسم الكائن الحي والتي ال ترى بالعين المجردة أو أجزاء منها أو أعضاء من الجسم باستخدام أجهزة ومعدات خاصة لهذا الغرض فهو علم يتكون من ثالث نشاطات متداخلة مع بعضها هي تحضير العينة للدراسة المجهرية واالستعمال الصحيح للمجهر وما يتعلق به من أجهزة مساعدة لتفسير ودراسة العينة وتدوين ورسم النتائج.. ويشمل علم التحضيرات المجهرية : تحضيرات مجهرية نباتية. تحضيرات مجهرية حيوانية. تحضيرات مجهرية طبية. تنقسم التحضيرات المجهرية إلى قسمين : )1( تحضيرات ال مقطعية ال يمكن عمل مقاطع فيها مثل أنسجة الدم. )2( تحضيرات مقطعية تخص المجهر الضوئي واإللكتروني. 70

72 ا ت طرق عديدة للتحضيرات المجهرية : التحضري حيث يتم وضع العينة بأكملها على الشريحة للفحص مثل الدودة الكبدية و القمل و منها نوعان : ا التحميل الكلي المؤقت. ب التحميل الكلي الدائم. وهي من أسرع الطرق التحضيرية الخاصة باألنسجة الرخوة مثل الخصى الحيوانية والسوائل الحيوية مثل الدم والبلغم. تستخدم لدراسة أجزاء من نسيج ماكالعضلة مثال حيث تؤخذ قطعة صغيرة من العضالت ثم بواسطة إبرة تشريح يتم تفكيكها إلى الوحدات التركيبية مثل األلياف العضلية حيث يمكن لضوء الميكروسكوب أن يخترقها. تستخدم لهرس العينات الرخوة وتحويلها من الحالة النسيجية إلى الحالة الخلوية على الشريحة الزجاجية مثل دراسة مراحل االنقسام الخلوي و مشاهدة الكروموسومات. تستخدم للدراسة السريعة للعينات الحية ولوقت قصير جداكما في فحص الخاليا الحرشفية للفم واألميبا والبراميسيوم. وهي األهم لدراسة العينات على مستواها النسيجي و الخلوي والغرض منها الحصول على قطاع نسيجي رقيق جدا, و هناك ثالث طرق رئيسية تستخدم لعمل المقاطع النسيجية. 1 تقنية البرافين )وهي الطريقة األشهر( paraffin) The ) technique 2 تقنية السللودين )وهي األكثر دقة( din) The cello ) technique 3 م 1 التحميل الكلي )Whole mount) 2 عمل مسحات )Smearing Method ) لنثر أو النشر 3 قنية التجميد )وهي األسرع( freezing) The )technique (Teasing Method) 4 السحق أو الهرس (Squashing Method) 5 الطريقة المباشرة )Direct Method) 6 التقطيع (Sectioning Method) 71

73 أنواع الشرائح المجهرية: الشرائح المؤقتة. الشرائح المستديمة. 1 2 استخدام الشرائح المؤقتة توفر العينة المطلوبة مما يتناسب ووقت الدرس. أن ال يتعدى تحضيرها وقت الحصة الصفية. 1 2 استخدام الشرائح المستديمة إذا كانت العينة نادرة ومن الصعب الحصول عليها في أي وقت. عندما يستغرق إعدادها وقتا طويال ال تتحمله الحصة الصفية 1 2 تحفظ مدة طويلة من الزمن وتستخدم فدي أوقداتكثيدرة, تختلدف المسدتديمة عدن المؤقتدة فدي أن العيندة تظدل فيها محتفظة بتركيبها وتشكيلها لعدة سنوات,ويمكن الرجوع إليها متى ما دعت الحاجة لذلك. خصائص تحضير الشريحة المجهرية المستديمة والمؤقتة : بالنسدبة للشددريحة المؤقتددة يحتدداج لتحضدديرها خطددوات متتابعددة وسددهلة وسددريعة بعددض الشدديء المستديمة فلها عدة خطوات لتحضيرها وتمر بعدة عمليات مثل : أمددا الشددريحة 1 عملية التثبيت: أ الحددرارة. ب ج استعمال المواد الكيميائية مثل الفورمالدهايد. تجميدها باستعمال غاز النيتروجين المسال. 2 عملية الصبغ: مثدل صدبغة الهيماتوكسدلين )لصدبغ النويدة بداللون البنفسدجي أو األزرق( وصدبغة االيوسدين )لصدبغ السديتو بدالم باللون األحمر(. معلومة: إذاكان النسيج المراد فحصه سدميك فانده يوضدع داخدل شدمع يسدمى بشدمع البدرافين السدائل ويتدرك إلدى أن يتجمد بعد ذلك يقطع بواسطة جهداز يسدمى الميكروتدوم ويمكدن صدبغ هدذه المقداطع بعدد وضدعها علدى الشدريحة الزجاجية. 72

74 تقنية البرافين Technique) (The Paraffin ويسدتخدم فيهدا شدمع البدرافين المنصدهر والصدلب و فيمدا يلدي الخطدوات المتبعدة لعمدل قطاعدات نسديجية و تتلخص فيما يلي: 2 تثبيت العينة. 4 نزع الماء من العينة. 6 تخليل أو تشريب العينة. 8 القطع. 11 صبغ القطاعات. 1 الحصول على العينة. 3 غسل العينة. 5 ترويق العينة. 7 طمر العينة. 9 تحميل القطاعات على الشريحة. 11 عمل شريحة مستديمة. الحصول على العينة specimen( )Obtaining the أوال :العينات الحيوانية : نحصل على العينة من الحيوان بعدة طرق منها : )الذبح التخنيع ضرب مؤخرة الرأس التخدير( الذبح : وهي من أسهل العمليات وأسرعها وتطبق على معظم الحيوانات الفقارية إذا استثنينا األسماك منها وتستخدم سكين حادة جدا وتتم عملية الذبح بقطع أوردة وشرايين الرقبة مع القصبة الهوائية والبلعوم. التخنيع : ويقصد بها شل الحيوان شال كامال وذلك بفصل الحبل الشوكي عن الجهاز العصبي المركزي أو المدح وبدذلك ال يحدس الحيدوان بداأللم أثنداء عمليدة التشدريح وتدتم عمليدة التخنيدع بغدرز إبدرة التشدريح الحدادة فيمدا بدين الفقدرة األولدى مدن الفقدرات العنقيدة والجمجمدة حتدى تصدل إلدى الحبدل الشدوكي ثدم تحدرك هدذه اإلبدرة يمندة ويسدرة حتدى نضمن االنفصال التام للحبل الشوكي عن الجهاز العصبي المركزي وكثيرا ما يطبق على الضفادع. 73

75 ضرب مؤخرة الرأس : وتهدف إلى ارتجاج مخي مفاجئ بحيث يصبح الحيوان بعدها في حالة غيبوبدة تامدة تدتم هدذه العمليدة باإلمسداك الجيدد بدالحيوان بحيدث تكددون الناحيدة البطنيدة باتجاهدك مددع تدرك منطقدة العندق والددرأس حدرة الحركدة ثدم يضددرب بمددؤخرة الددرأس الخلفيددة ويشددكل سددريع ومفدداجئ علددى أي جسددم صددلب مثددل الطاولددة ويجددب أن يددتم االرتجدداج المخي بضربة واحدة فقط بدون تردد أو خوف وإال تألم الحيدوان ويعدرف نجداح العمليدة فدي حالدة الفدار بخدروج الدم من فتحتي األنف ( هذه الطريقة تناسب الف ران والضفادع ) ثانيا : العينات النباتية من المفيد مراعاة المالحظات التالية قبل البدء في جمع العينات النباتية : 1 أن يكون الجامع على دراية بطبيعة النبات والعينات لتكون النتائج ايجابية وجيدة 2 يجب اختيار العينة النباتية الصالحة واستبعاد التالفة والمجروحة. 3 قتل وتثبيت العينة مباشرة في إحدى المثبتات التي تتالءم وطبيعة العينة. 4 اختيار العينات المصابة إذاكان الهدف من جمع العينة هو دراسة األمراض النباتية. 5 عنددد قطددع األوراق أو الوريقددات مددن العنددق اسددتخدام شددفرة حددادة دون الضددغط عليهددا أو جرهددا للمحافظددة على األنسجة من التمزق. 6 عندددد عددددم اسدددتعمال األوراق أو السددديقان أو األزهدددار مباشدددرة للتحضدددير المجهدددري حفظهدددا فدددي محلدددول كحول ايثيلي )%71( 7 عندددد جمدددع الجدددذور مراعددداة عدددم احتكددداك الجدددذر وفروعددده بحبيبدددات التربدددة فقدددد يسدددبب أضددرار فتتمدددزق األنسجة أو تبقى تحت سطح التربة لذلك يجب الحفر حدول الجدذر ونزعدة مدعكميدة التربدة المحيطدة ثدم غسله بالماء حتى ينظف من حبيبات التربة وقد يلزم استعمال فرشة ناعمة إلزالة حبيبات التربة. 8 تحفظ األوراق الزهرية في الثالجة بعد لفها في ورق مبلل بالماء ووضعها في وعاء مغلق. 74

76 Slide تحضير شرائح مجهرية مؤقتة Temporary: أوال : تحضير الشرائح المؤقتة تحضير شريحة مؤقتة لمسحة من الدم البشري : المواد واألدوات المطلوبة: عينة من دم بشري, شرائح زجاجية, لهب بنزن,أغطية شرائح زجاجية. طريقة العمل : 1 خذ قطرة من الدم وضعها على الشريحة 2 ثبت الشريحة بإحدى يديك, واستعمل اليد األخرى لوضع شريحة ثانية أمام قطرة الدم مباشرة 3 اسحب الشريحة العلوية إلى الخلف حتى تالمس قطرة الدم 1 4 اترك الدم ينساب على الحافة السفلية للشريحة العلوية. 5 ادفع الشريحة العلوية إلى األمام بحركة لطيفة إلى أن تنتهي عينة الدم قبل بلو نهاية الشريحة السفلية 1 6 تأكد أن الشريحة التي تم تحضيرها مقبولة ضمن الشروط اآلتية : أ أن ال يكون هناك خطوط ممتدة عبر الفلم أو خالله. بأن ال يكون الفلم طويال جدا. جأن ال تكون المسحة )العينة( ثخينة جدا. دأن ال يحتوي الفلم على فجوات. 7 ضع غطاء الشريحة عليها وافحصها تحت المجهر,حيث تظهر خاليا الدم الحمراء بشكل واضح, وبالتالي نكون قد حضرنا شريحة مؤقتة ( عن طريق السحب ) 75

77 تحضير شريحة مؤقتة لخلية نباتية )) خاليا البصل (( بصل, ملقط, شرائح زجاجية, أغطية شرائح زجاجية, ورق نشاف, قطارة, إبرة المواد واألدوات تشريح, محلول اليود أو صبغة المثيل األزرق. المطلوبة: 1 اقطع البصلة طوليا إلى أربعة أقسام. 2 ضع قطرة من الماء في وسط الشريحة. 3 استخلص باستخدام الملقط قطعة صغيرة من الغشاء الرقيق المبطن للسطح الداخلي من البصلة, وضعه فوق قطرة الماء في وسط الشريحة, وافرشه بشكل جيد. 4 امسك غطاء الشريحة من حافتيه, و لتالمس الحافة الثالثة قطرة الماء و الشريحة, ثم أنزله تدريجيا باستخدام إبرة تشريح حتى يصل الغطاء إلى سطح الشريحة, و احرى على أن ال يحبس الغطاء أي فقاعة هواء بينه و بين الشريحة. 5 اصبغ الشريحة بإضافة قطرة من محلول اليود أو صبغة المثيل األزرق إلى حافة غطاء الشريحة, و يمكن نشرها تحت الغطاء باستخدام ورقة نشاف. طريقة العمل : وبذلك تكون قد حصلت على شريحة مؤقتة لخاليا البصل يظهر فيها تحت المجهر 76

78 تحضير شريحة مؤقتة للحيوانات األولية : جهاز الطرد المركزي )Centrifuge(,أنابيب اختبار, عدد )2( من القياس نفسه المواد واألدوات قطارة, شرائح زجاجية, أغطية شرائح, عينة من ماء راكد. المطلوبة: طريقة العمل : 1 ضع عينة الماء الراكد في أنبوب زجاجي, وضع في األنبوب اآلخر الكمية نفسها من ماء نقي. 2 ضع األنبوبين متقابلين في جهاز الطرد المركزي. 3 أغلق الجهاز بغطائه الخاى و حرك قرى السرعة حسب السرعة التي تراها مناسبة و لتكن ( 1111 دورة / دقيقة ) و قرى الزمن على ( 5( دقيقة 4 صل الجهاز بالتيار الكهربائي ثم اضغط مفتاح التشغيل و اتركه حتى يتوقف وحده. 5 اخرج األنبوبين من داخل الجهاز. 6 خذ األنبوب المحتوي على العينة و اسكب السائل الموجود فيه على أن يبقى الرائق في أسفل األنبوب. 7 خذ نقطة من الرائق المترسب في قعر األنبوب بواسطة القطارة و ضعها في وسط شريحة زجاجية نظيفة. 8 امسك غطاء الشريحة من حافتيه و اجعل الحافة الثالثة تالمس العينة و الشريحة, ثم أنزله تدريجيا حتى يصل إلى سطح الشريحة و احرى على عدم تشكل فقاعات من الهواء بين الشريحة و الغطاء. 9 و بذلك تكون الشريحة جاهزة للفحص تحت المجهر كشريحة مؤقتة. 77

79 طريقة أخرى لتحضير شريحة مجهرية للحيوانات األولية : 1 خذ عينات من مياه عذبة راكدة من مصادر مختلفة ومعها بعض الطين الموجودة في القاع واخلطيها معها في حوض به بعض النباتات المتحللة, ضعي الحوض في مكان دافئ مدة ثالث أيام. 2 خذ قطرة من الريم الذي يتكون على سطح الماء في المزرعة السابقة مستعملة أنبوبة مسحوبة الطرف و ضعيها على شريحة زجاجية وضع عليها الغطاء الزجاجي و افحصيها تحت المجهر و تعرفي على الحيوانات التي تشاهدها. 3 ارفع غطاء الشريحة قليال بإبرة رفيعة ثم أضيف قطرة من محلول الصمغ الشفاف, ثم أعيد الغطاء و أعد الفحص تجد أن حركة الحيوانات أصبحت بطي ة. 4 افحص الحيوانات األولية الموجودة تحت القوة الكبرى و الحظ األهداب الموزعة على الجسم و األنبوبة داخل الخلية. 5 أضف قطرة من محلول اليود لتظهر األجزاء المختلفة بوضوح. تحضير المواد واألدوات المطلوبة: شريحة مؤقتة لفطر الخميرة : ملعقة خميرة بيرة, ملعقة سكر ناعم, )11( سم 3 ماء دافئ. 1. ضع خميرة البيرة مع السكر فيكأس زجاجي. 2. يضاف الماء الدافئ للكأس نفسه, و يقلب بساق زجاجية و يترك مدة إلى أن يحدث التكاثر. 3. ضع قطرة من معلق الخميرة على شريحة زجاجية و افحصه تحت المجهر. طريقة العمل : 78

80 ** مالحظات ** 1. خلية الخميرة صغيرة بيضاوية الشكل. 2. الخلية لها جدار يضم البروتوبالزم. التكاثر في الخميرة : تكاثر ال جنسي و تالحظ األكياس الدقيقةكلكيس يحتوي على ثمانية أكياس و الكيس الذي ينتج من التكاثر الجنسي. فحص التجرثم في عفن الخبز : 1 اترك قطعة الخبز مبللة تحت ناقوس زجاجي أسبوع تقريبا ليتكون غزل فطري على سطح القطعة 2 خذ بعضا من الغزل الفطري باإلبرة وانشره بلطف على شريحة زجاجية. 3 ضع قطرة ازرق مثيلين. 4 افحص الغزل مجهريا. تحضير شريحة مؤقتة لخلية حيوانية : طالئي اخلاليا اخلدية 1 يتكون الوجه الداخلي للخد من خاليا يمكن إزالتها بسهولة عن طريق خدشها بواسطة نكاشه أسنان نظيفة أو عن طريق قطنه طبية للمسح. 2 نضع قطرة ماء على شريحة زجاجية وانشر الخاليا الموجودة على طرف النكاشه أو القطنة في قطرة الماء وذلك بتحريك العمود في الماء. 79

81 3 نلونها بواسطة أزرق المثيلين أو صبغة اليود ثم نغطي الكل بواسطة غطاء الشريحة. 2 ونالحظ ما يظهر لنا تحت المجهر )بالفحص بالعدسة الصغرى ثم الكبرى ) وتكون الخاليا على الشكل التالي: تحضير شريحة لنسيج عصبي من خاليا المح أو الحبل الشوكي في األرنب بطريقة الدعك " الهرس". أحضر شريحة مجهرية نظيفة. بواسدطة إبدرة تشدريح خدذ قطعدة صدغيرة جددا مدن المدح أو الحبل الشوكي. أ دعكهدددا واهرسدددها علدددى الشدددريحة باسدددتخدام أنبدددوب زجدداجي حتددى يتكددون طبقددة رقيقددة فددي وسددط الشددريحة وتخلص من األجزاء الكبيرة. ضع عليها قطرتان من صبغة أزرق الميثلين. اتركهددا تتشددرب الصددبغة عدددة دقددائق كمددا يمكددن وضددع الصبغة على القطعة ثم دعكها وهرسها معا " ضددع عليهددا غطدداء الشددريحة وتجنددب ظهددور فقاعددات الهدددواء بوضدددع الغطددداء مائدددل بزاويدددة 454 علدددى إحددددى حدواف الشدريحة وامسدك الطدرف األخدر للغطداء بدإبرة تشريح و اتركه يسقط في الهواء. افحص الشريحة تحت المجهر. 80

82 طريقة العمل : تحضير شريحة لنسيج دهني 1 تؤخذكشطة من أي نسيج دهني )طائر, أرنب ) 2 بطريقة الفرد يفرد النسيج على الشريحة )هو نشر وشد أطراف العينة الرخوة باستخدام الطرف المدبب إلبرتي تشريح حتى ال يكون هناك انثناءات وتعرجات في العينة المراد فحصها ) 3 نضيف صبغة سودان للعينة. 4 تغطى بالغطاء وتفحص. تحضير شريحة لنسيج عضلي بطريقة النشر: طريقة العمل 1 يؤخذ قطعة من النسيج العضلي من فخذ األرنب. : 2 يوضع النسيج على الشريحة ويوضع عليها نقطة من الجليسرين. 3 تنشر بإبرة تشريح نشرا طوليا للنسيج. 4 يوضع عليها نقاط من الجليسرين وغطاء الشريحة. 5 تفحص بالمجهر. تحضير شريحة لنسيج ضام )غضروف ) بطريقة التقطيع: تؤخذ قطعة من صيوان أذن األرنب وألنها رقيقة ال نحتاج إلى عمل قطاع 1 طريقة العمل : توضع على الشريحة على شكل طبقة رقيقة جدا. 2 يوضع عليها نقاط من الجليسرين وغطاء الشريحة. 3 تفحص بالمجهر. 4 81

83 طريقة تحضير شريحة مؤقتة لدراسة مراحل االنقسام الميتوزي طريقة العمل : :)Cultivation( مرحلة الزراعة 1 ينمددي البصدددل فددي المددداء فدددي درجدددة حدددرارة الغرفدددة حتى يصل طول الجذور حوالي )3 4 (سم. :)Fixation( مرحلة التثبيت 2 أقطدددددددع المنددددددداطق الطرفيدددددددة )المريسدددددددتيمية( مدددددددن الجذور النامية )5 1 1 (سم ثم ضدعها فدي مثبدت كحولي )3( أجزاءكحول ايثيلدي : )1( جدزء حمدض خليك ثلجي( لمدة )24( ساعة. )الغدددددرض األساسدددددي مدددددن عمليدددددة التثبيدددددت هدددددو القتدددددل المفدداجئ للنسدديج بدددون أي تشددوه لمكونددات الخليددة المددددددراد دراسددددددتها أي أندددددده يعمددددددل علددددددي وقددددددف كددددددل العمليات واألنشطة الحيوية بداخل الخلية( 3 أغسدددددل بالمددددداء مدددددن )32( مدددددرات,ويمكدددددن حفدظ العيندات فدي الثالجدة بعدد وضدعها فدي كحدول )%71( لحين االستعمال. :)Hydrolysis( مرحلة التحلل المائي 82 4 تعامددددددددددل الجددددددددددذور بددددددددددد )1 عيدددددددددداري ) حددددددددددامض الهيددددددروكلوريك عندددددد درجدددددة حدددددرارة ) 61 م 4 (لمددددددة حوالي )65( دقائق. وتسمي هذه العملية بالتحلدل المائي ) Hydrolysis )فهي تساعد علدي تفكيدك الروابط البروتوبالزمية وتليين الجدر الخلويدة وبالتدالي يسدددهل هدددرس هدددذه الجدددذور وفدددرد النسددديج النبددداتي,

84 وظهددوره فددي صددورة صددفوف مددن الخاليددا غيددر متراكبددة فوق بعضها البعض. :)Staining ( مرحلة الصبغ 5 ضع عينة من الجذور علي شدريحة نظيفدة فدي قطدرة مدن محلول خليك أورسدين أو خليدك كدارمن Aceto ( )Orcein or AcetoCarmine لفتدرة وجيدزة 11( )15 دقيقة. 6 أقطدددع القمدددة الناميدددة بواسدددطة إبدددرة ثدددم تخلدددص مدددن الجزء الباقي. :)Squashing ( مرحلة الهرس أهرس الجزء المريستيمي في الصبغة بواسطة اإلبرة. 7 8 غدط بالغطداء ثدم أضدغط برفدق بدين طيدات ورقدة الترشديح لفرد الخاليا وطرد فقاعات الهواء. 9 شددمع غطدداء الشددريحة بواسددطة شددمع البددرافين أو مددادة طدددالء األظددددافر وذلدددك لعدددددم جفددداف العينددددة النباتيدددة وعدددددم جفداف الصدبغة أيضدا ويمكدن حفدظ الشدرائح فدي الثالجدة لمدة )3( أيام. :)Examination( مرحلة الفحص 11 أفحددددددددددص التحضددددددددددير بواسددددددددددطة الميكروسددددددددددكوب مستخدما القوة الصغرى ثم القوي الكبرى. 11 حدد األطوار المختلفة لالنقسام غير المباشر. 83

85 طريقة العمل : تحضير شريحة لفحص الثغر وتركيبة : 1 امسك وريقة النبات بإبهام وسبابة اليد اليسرى. 2 امسك ملقط بإبهام وسبابة اليد اليمنى. 3 انزع البشرة السفلى لوريقة نبات. 4 ضع البشرة المنزوعة بسرعة في كحول وذلك لالحتفاظ بالثغر مفتوح. 5 التقط التحضير من الكحول بفرشاة. 6 ضع التحضير في منتصف شريحة زجاجية نظيفة. 7 افرد التحضير على الشريحة بفرشاة. 8 لتوضيح العينة ضع قطرة من محلول اليود على التحضير. 9 ضع غطاء الشريحة بحذر حتى ال تتكون فقاعات هوائية. 11 د ضع الشريحة على منضدة المجهر. 11 د افحص الشريحة والحظ الثغر مفتوح أم ال. تحضير شريحة لقطاع عرضي لجذور نبات ذي فلقتين ( جذر فول حديث (: جذر فول حديث جزرة حمراء تستخدم بدال من الشمع شرائح زجاجية فارغة أغطية المواد شرائح زجاجية قطارة إبرة تشريح محلول يود ميكروتوم سكين حادة ( شفرة ) واألدوات خاصة بالميكروتوم مجهر. المطلوبة : طريقة العمل: 1 أسلق جزرة حمراء و أتركها تبرد. 2 شذبها من الخارج بحيث تعطي نفس قطر فتحة الميكروتوم. 3 أثقب في منتصف الجزرة حتى ينفذ من الجهة األخرى و يكون قطر الثقب مساويا لسمك جذر الفول المراد أخذ القطاع منه. 4 مرر جذر الفول خالل ثقب الجزرة ثم ثبت الجزرة المسلوقة على الميكروتوم. 5 تحكم في سمك المقطع الذي ستعده من الجذر الحديث و ذلك باستخدام الميكرومتر الموجود أسفل عامود الميكروتوم, بحيث تثبت أوال صفر الميكرومتر على صفر 84

86 الميكروتوم, و أحرى على بقاء السطح العلوي للعينة ( الجذر الحديث للفول ) في مستوى سطح الميكروتوم نفسه. 6 حرك المقبض الخاى بالميكروتوم باتجاه عقارب الساعة إلى أن ينطبق الرقم الذي تريده على صفر الميكروتوم. 7 اقطع المقطع بسكين حاد أو شفرة حالقة جديدة, و ليكن سمك القطاع ما بين ( 6 8 ميكرون ). 8 حمل قطاعات الجذر على ماء في طبق بتري, و خذ بإبرة التشريح بعضها و حملها على شريحة زجاجية نظيفة فوق قطرة ماء. 9 ضع قطرة يود بواسطة قطارة فوق القطاع, ثم نشفه بورق النشاف ثم أسقط غطاء الشريحة بعد وضعه بزاوية 45 درجة تدريجيا بواسطة الملقط الخاى باألغطية. 11 أضبط الشريحة على العدسة الشي ية الصغرى ثم حرك الضابط الكبير حتى تتضح بعض المعالم ثم أضبط بالضابط الصغير حتى تظهر كل التفاصيل و الحظ مكونات القطاع العرضي تحضير شريحة لقطاع عرضي في ساق نبات ذي فلقتين : ساق فول حديث د جزرة حمراء د شرائح زجاجية فارغة د المواد ميكروتوم د شفرة )موس( د قطارة د إبرة تشريح د أغطية واألدوات شرائح زجاجية د محلول يود د مجهر ضوئي. المطلوبة : خطوات العمل: تتبع مراحل و خطوات تحضير قطاع في )الخطوات السابقة( جذر فول حديث وبعد ضبط الشريحة على العدسة الشي ية الصغرى ستتضح مكونات القطاع العرضي في الساق. 85

87 تحضير شريحة لقطاع عرضي في ورقة نبات ذي فلقتين ورقة نبات فلقتين د جزرة حمراء تستخدم بدال عن شمع البرافين د ميكروتوم د سكين حادة أو المواد واألدوات شفرة حالقة د قطارة د إبرة تشريح د شرائح زجاجية د أغطية شرائح زجاجية د ملقط د مجهر. المطلوبة : خطوات العمل : 1 اسلق جزرة حمراء و اتركها تبرد. شد 2 ها من الخارج بحيث تعطي نفس قطر فتحة الميكروتوم )كما مر في تحضير شريحة قطاع عرضي في جذر فول( 3 ثبت الورقة بفرشها طوليا على الجزرة, بحيث تكون ملفوفة على الجزرة و قمة الورقة لألعلى على مستوى سطح الميكروتوم, و اربطها بخيط في األسفل و ذلك بلفة عدة مرات على الورقة و الجزرة معا في أسفل الجزرة. أي يكون لف الخيط على الجزء الذي سيكون داخل الميكروتوم )في قاع التجويف( 4 أكمل بقية الخطوات التي اتبعتها في عمل قطاع في الجذر 5 اضبط الشريحة على العدسة الشي ية الصغرى حتى تبدأ تتضح مكونات القطاع العرضي في الورقة, ثم اضبط بالضابط الصغير حتى تصهر كل األنسجة بوضوح. تحضير شريحة لفحص حبوب اللقاح خطوات العمل : 1 ادهك بالملقط بعض الحبوب الناضجة لزهره حنك السبع علي ميسم نفس الزهرة أو زهرة أخرى من نفس النوع. 2 اسحق الميسم بما عليه من حبوب لقاح على شريحة زجاجية عليها قطره ماءغطي الشريحة. 3 أترك الشريحة في مكان دافئ )6( ساعات علي األقل. 4 أفحص بالقوة الصغرى ثم الكبرى. 86

88 إعداد الشرائح اجملهرية املستدمية: تحضير الشريحة المستديمة: اإلعداد لعمل القطاعات في العينة: 1 قتل الحيوان والحصول على العينة وتتم عملية القتل بعده طرق )الذبح, التخنيع(... تثبيت العينة وذلك لحفظ المكونات الخلوية ثابتدة دون أن يصديبها تغيدر أو تلدف نتيجدة للتحلدل الدذاتي بفعدل بعدض األنزيمدات أو نشداط عددد مدن الكائندات الحيدة الدقيقدة ومدن أهدم محاليدل التثبيدت محلدول الفورمالين الكحولي, محلول زنكر, محلول بوين, محلولكارنوري, مثبت فارمر. 2 غسل العينة بعد إتمام عملية التثبيت ويجب التخلص من آثار المثبت المتبقية في العينة كما يلي : 3 تغسل العينات المثبتة في مثبت بوان بالكحول )%71( حتى يزول اللون األصفر تغسل العينات المثبتة في زنكر بالكحول )%96( مشبع بداليود ومددة الغسيل تتراوح من) 5 8 (ساعات. العينات المثبتة في مثبت روسمان تغسل بالكحول )%96( العينات المثبتة في الفورمالين تغسل بماء الصنبور الجاري لمدة ) 24 (ساعة. تحفظ العينة في )%71( كحول ايثيلي. 4 نزع الماء من العينة : المداء ال يمتدزج مدع شدمع البدرافين لدذلك يجدب الدتخلص مدن المداء الموجدود فدي النسيج الخلوي حتى تسهل عملية نفاذ البرافين المصهور إلدى داخدل األنسدجة وتدتم عمليدة ندزع المداء بتمريدر العيندة علدى سلسدلة متدرجدة االرتفداع فدي التركيددز مدن محاليدل الكحدول االيثيلدي وتتدراوح المدددة الالزمدة لتدرك العيندة فديكدل خطدوة مدن خطدوات ندزع المداء فدي محاليدل الكحدول المختلفدة التركيدز مدن )31( دقيقة إلى ثالث ساعاتكحد أقصى ويفضل أن تمرر العينة في مراحلها األخيرة من خطوات 5 87

89 نزع الماء على محلولين منفصلين من الكحول المطلق ولمدة مرة وذلك لزيادة التأكيد من تمام نزع الماء من العينة. تتراوح من ساعتين إلى ثالث ساعات فدي كدل عنددد تحضددير سلسددلةكحددول متدرجددة التركيددز يفضددل اسددتخدام )%95( كحددول ايثيلددي بدددال مددن الكحددول المطلددق ومندده تعمددل التركيددز المطلوبددة فلكددي نحضددر محلددول بتركيددز )%71( نأخددذ ) 71 (مددل مددن محلددول الكحول )%95( ونضيف إليه )25( مل من الماء المقطر ليكون التركيز النهائي من الكحول )%95( ترويددق العيندة : الكحددول ال يمتددزج مددع شددمع البددرافين لددذا يعتبددر محلددول الزيلدددول مدددن أنسدددب المحاليدددل المروقدددة لسدددهولة امتزاجددده مدددع البدددرافين والكحول وهناك مواد يمكن استخدامهاكمزوقات مثل التولوين والبنزين والكلوروفورم ولكنها سريعة التطاير. تخليل العينة :المقصدود مدن تخليدل العيندة هدو تشدبع العيندة بدالبرافين وتدتم العمليددة بتمريددر العينددة علددى مددزيج متسدداو مددن الزيلددول البددرافين ثددم تنقددل العينة في شدمع البدرافين المنصدهر داخدل الفدرن وتكدرر هدذه العمليدة لعددة مرات ( من مرتين إلى خمس مرات ) كل مرة لمدة نصف ساعة. طمدر العيندة : يسدتخدم فدي العيندات الصدلبة شدمع البدرافين الصدلب والدذي تتدراوح درجدة انصدهاره بدين )56( و )58( درجدة م ويدة أمدا العيندات الليندة فيستخدم لها شمع البرافين الرخدو والدذي تتدراوح درجدة انصدهاره فيمدا بدين )51( و )52( درجددة م ويددة ويسددتخدم لعمليددة الطمددر صددندوق مفتددوح الجهتددين )علبددةكبريددت فارغددة( ويفضل أن تدهن حواف القالب أو الصندوق الداخلية بمدادة الجلسدرين حتدى ال يلتصدق شدمع البدرافين بحوافه وتتم العمليةكما يلي : ضع قالب الطمر على لوح زجاجي رقيق. اسكب شمع البرافين المنصهر في القالب المفتوح من الجهتين. ضع العينة مباشرة بملقط وسط الشمع المنصهر. 88

90 حرك العينة قليال بإبرة تشريح ساخنة حتى تضمن عدم تكون فقاعات هوائية. أغمدر القالدب بعدد تجمدد الطبقدة الخارجيدة للشدمع فدي مداء بدارد ( ) درجدة م ويدة يتصلب البرافين. حتدى تقطيع العيندة : ثبت العينة جيدا على حامل العينة في الميكروتوم حدد سمك القطاع المرغوب فيه 9 ( 5 7( ميكرومتر وتكون القطاعات الجيدة على شكل سلسلة متصلة من القطاعات 11 تحميددل القطاعددات : ويقصددد بهددذه بإحدى الطريقتين التاليتين: العمليددة وضددع القطدداع النسدديجي علددى الشددريحة المجهريددة وتددتم الطريقة األولى : ضع القطاع في حمام مائي درجة حرارته )41 45( درجة م وية ويترك القطاع يطفو على سطح الماء دقيقة أو دقيقتدين حتى ينفرد تماما. مرر الشريحة المجهرية تحت القطاع بحيث يكون فدي وسدط الشدريحة مدع عددم تكدون فقاعدا بين القطاع والشريحة. هوائيدة تجفف الشريحة في درجة حرارة )45( درجة م وية لمدة) 24 ( ساعة. الطريقة الثانية: ينقدل القطداع مباشدرة إلددى شدريحة مجهريدة عليهدا قطدرة مددن المداء المقطدر ثددم توضدع الشدريحة علددى مجفف الشدرائح ( 45 درجدة م ويدة ( وتتدرك حتدى تتبخدر القطدرة المائيدة ويلتصدق القطداع جيددا علدى الشريحة. 89

91 اإلعداد لصبغ القطاعات: عملية الصبغ : ال تستطيع األصدبا النفداذ فدي األنسدجة الخلويدة مدا دامدت محاطدة بشمع البرافين لذلك يجب أن يذاب الشمع منها تمامدا بدالزيلول ويجدب الدتخلص من الزيلول ألنه غير مناسدب لألصدبا ويدتم الدتخلص منده بدالكحول المطلدق ثدم تنقدل القطاعدات إلدى بي دة مشدابهة للبي ة الذائبة فيها الصبغة. مثدال : إذاكاندت الصدبغة مذابدة فدي المداء يجدب تميدؤ القطاعدات وذلدك بتمريرهدا علدى سلسدلة تركيزهدا متددرج االنخفاض من محاليل الكحول حتى تصل إلى الماء. وبنفس الطريقة إذاكانت الصبغة مذابة في تركيدز معدين مدن الكحدول. تسدتخدم صدبغة الهيماتوكسدلين لصدبغ أنويده الخاليدا وصدبغة األيوسدين لصدبغ مدادة السديتوبالزم ويغسدل الزائد من الصبغة بالماء المقطر. عمل الشريحة المستديمة: بعدد االنتهداء مدن عمليدة الصدبغ تبددأ عمليدة إعدداد الشدريحة المجهريدة للتحضدير المسدتديم وذلدك باسدتخدام مدددادة شدددمعية أو بالسدددتيكية مثدددل مدددادة بلسدددمكنددددا. معظدددم المدددواد الحافظدددة المسدددتخدمة فدددي عمدددل الشدددرائح المسدتديمة ال تدذوب فدي المداء أو الكحدول لدذلك يجدب الدتخلص مدن المداء والكحدول الموجدودة فدي القطاعدات المصبوغة وتتم عملية التخلص بتمرير القطاعدات علدى سلسدلة متدرجدة االرتفداع فدي التركيدز مدن محاليدل الكحدول االيثيلي ثم يدتم الدتخلص مدن الكحدول االيثيلدي بتمريدر القطاعدات علدى محاليدل نقيدة مدن الزيلدول ثدم يضداف قطدرة من محلول بلسمكندا المدذاب فدي الزيلدول علدى القطداع مباشدرة ثدم يوضدع غطداء الشدريحة بحدذر حتدى ال تتكدون فقاعدات هوائيدة بدين الشدريحة والغطداء ثدم تجفدف الشدريحة لمددة )24( سداعة علدى مجفدف الشدرائح لكدي يجدف بلسمكندا وتكون جاهزة للفحص تحت المجهر. ( يكتب اسم القطاع على ورقة وتلصق بالشريحة ). 90

92 )التقنية النسيجية( احتياطات هامة عند تحضير العينات النسيجية : يسددبق الحصددول علددى العينددة تخدددير الحيددوان أو قتلدده وعنددد تشددريح الحيددوان واخددذ األجددزاء المناسددبة مددن األعضدداء, يراعددى عنددد تشددريح الحيددوان ألخددذ جددزء مندده أن يددتم التشددريح فددي محلددول فسدديولوجي مناسددب ليقلدل مدن الخلدل الدذي يحددث فدي طبيعدة النشداط الكيمداوي للعضدو عندد التشدريح أو أن يصدبكميدة مدن هذا المحلول فوق الجزء المراد الحصول عليه. عند نزع العضو من الحيوان يراعى اآلتي: غسله في المحلول الفسيولوجي إلزالة الدم العالق وإفرا محتواه وغسله إذاكان هذا العضو مدن الجهاز الهضمي. أال يعرض العضو إال ألقل ضغط عليه عند اإلمساك به. أال يسمح أبدا بجفاف العضو في الهواء. أن يسددتخدم مشددرط حدداد لقطددع العضددو إلددى أجددزاء مناسددبة ذات أسددطح مسددتوية ال يزيددد سددمك الجزء عن نصف سم. تثبيت العينات النسيجية بالمثبت المناسب ويراعى اآلتي: اختيار تركيب ومدة المثبت الذي يتناسب مع العينة فمثال األنسجة النباتية أكثر حامضية من األنسجة الحيوانية لهذا ضرورة مراعاة ذلك في اختيار المثبت. أن يكون المثبت سريع التخلل والنفاذ إلى الخاليا النسيجية. وضع النسيج بسرعة في المثبت. استخدامكمية مناسبة من المثبت ال تقل عن )21( ضعف حجم قطعة النسيج رج زجاجة المثبت عدة مرات أثناء فترة التثبيت ضمانا لتخلل المثبت لجميع أجزاء العينة. مراعاة مدة التثبيت حسب نوع المثبت. غسل العينات النسيجية بالماء أو المحلول المناسب للتخلص من آثار المثبت. تجفيف العينة بنزع مائهدا وذلدك بواسدطة سلسدلة تصداعدية مدن الكحدول االيثيلدي تمهيددا لتشدربيها وطمرهدا بالشمع الذي ال يمتزج بالماء. )1 )2 )3 )4 )5 91

93 الترويق بالزيلول وذلك ليحل محل الكحول المستخدم في الخطوة السدابقة والدذي ال يدذوب بالشدمع لدذا يشترط في محلول الترويق أن يكون قابال للذوبان فيكل من الكحول والشدمع,كمدا يقدوم الزيلدول بجعدل األنسجة شفافة. * يمكددن أن يسددتدل علددى عدددم اكتمددال إزالددة المدداء مددن األنسددجة بظهددور طبقددة رقيقدده مددن راسددب أبدديض عليها عند وضعها في محاليل الترويق. وتتراوح مدة الترويق ما بين )53 ) دقائق لكل خطوه. )6 7( التشريب بشمع البرافين حيث يتم إحالل الشمع محل محلول الترويق, وبدذلك يدتم إدخدال الشدمع داخدل النسيج مما يؤدي إلى تدعيمه يتناسب مع تحمل النسيج لعملية القطع. 8( الطمر بالشمع وهو عبارة عن وضع العينة النسيجية بكيفية معينة في قوالب خاصة تمدأل بالشدمع المنصدهر إلحاطة العينة به لجعلهاكتلة متماسكة ثم تقطيعها ويراعى في عملية الطمر اآلتي: اختيار نوع البرافين الجيد يحتاج خبرة ودقة مالحظة. إجراء اختبار للشمع لمعرفة درجة انصهاره ومالمته للقطع والتأكد من عدم وجود شوائب. العمل بدقة لتفادي ظهور الفجوات الهوائية أو ظهور شمع عجيني أبيض. العمل بسرعة لتجنب تصلب الشمع قبل ضبط وضع النسيج. التنبه إلدى دهدن جميدع أجدزاء القالدب مدن الدداخل بمدادة الجلسدرين قبدل صدب الشدمع حتدى يسدهل ندزع القالب الشمعي منها. 9( تقليم القالب الشمعي بحيدث نبقدي علدى الكميدة الالزمدة مدن الشدمع حدول النسديج, ويدتم ذلدك باسدتعمال شفرة حادة ويجب أن يكون طرفا القالب العلوي والسفلي متوازيين ألن ذلك يساعد علدى تكدوين شدريط مستقيم من المقاطع 11( تقطيع األنسجة في القوالب الشمعية بواسطة الميكروتوم مع التأكد من التالي : اختيار سمك القطاعات المطلوبة بالميكرومتر عن طريق التدريج الميكدرو متدري بالجهاز. الوضع الصحيح للسكين )زاوية القطع ) و ربط لوالب تثبيت السكين جيدا. أن يكون وضع العينة متعامد على السكين وليس المكعب الشمعي. 92

94 بعددض القطاعددات الناتجدة قددد تكددون مجعدددة أو ملتويدة وللتغلددب علددى ذلددك توضددع القطاعددات علددى شددريحة مبللة بالماء ويضغط عليها قليال حتى تصبح منبسطة أو توضع القطاعدات بدين شدريحتين وتدربط بماسدك من المطاط. 11( عند فرد القطاعات و وضع القطاع النسيجي على الشريحة المجهرية يمكن فرد القطاعات الشمعية أما باستعمال حمام مائي ساخن يوضع علية شبكة أو باستعمال سطح ساخن مع التنبه للوقت المناسب للتسخين حتى ال يتفتت أو يحدث تشوه في القطاع. 12( أثناء اإلعداد لصبغ القطاعات ضرورة مراعاة التالي : إزالة الشمع من القطاعات وذلك بوضعها في الزيلول لمدة )5( دقددددائق وتكددددرر هددددذه العمليددددة مددددرة أخددددرى إلتمددددام عمليددددة اإلزالددددة ألن األصددبا ال تسددتطيع النفدداذ فددي األنسددجة الخلويددة مددا دامددت محاطددة بشمع البرافين لذلك يجب أن يذاب الشمع منها تماما بالزيلول. يجب التخلص من الزيلول ألنه غير مناسدب لألصدبا ويدتم الدتخلص مدن منده بدالكحول المطلدق ثدم تنقل القطاعات إلى بي ة مشابهة للبي ة الذائبة فيها الصبغة. التحميدل وهدو الوسدط الدذي يحفدظ فيده التحضديركمرحلده نهائيدة بعدد عمليدة الصدبغ وبنداء علدى اخدتالف أوساط التحميل عديدة فأنه البد من مراعاة التالي : 1 في األنواع التي تمتزج بالماء, في هذه الحالة فإن إزالة الماء من القطاعات أو العيندات ليسدت ضرورية. 2 فدددي األوسددداط التدددي ال تمتدددزج مدددع المددداء, وفدددي هدددذه الحالدددة يجدددب إزالدددة المددداء مدددن القطاعدددات )العينات( قبل مرحلة التحميل بهذه األوساط. )13 وهناك عوامل يجب توفرها في وسط التحميل : 1 أن يكون معامل انكساره قريبا من معامل انكسار الزجاج. 2 أن يكون قابال لالمتزاج مع وسط الترويق. 3 أن ال يتفاعل مع مكونات النسيج أو الصبغة. 4 أن ال يسبب تشويها لتراكيب العينة المصبوغة. 5 أن ال يضيف تراكيب اصطناعية إلى العينة. 6 عدم إزالة لون الصبغة. 93

95 7 أن ال يتشقق أو يأخذ شكال حبيبيا عند الجفاف. 8 أن ال ينصهر بالحرارة الناتجة أثناء الفحص تحت المجهر. بعض المشاكل التي تظهر أثناء تحضير القطاعات النسيجية ومسبباتها المشكلة التفاف القطاعات على حافة السكين المسببات زاوية انحناء السكينة منخفضة وتحتاج إلى ضبط وكذلك إذاكانت حرارة الغرفة مرتفعة أو الشمع المستخدم لين. تمزق القطاعات عدم القدرة بالحصول على شريط شمعي عدة أسباب : 1 وجود نتوءات بحافة السكين. 2 الشمع المستخدم غير نقي حافتا القالب الشمعي ليستا متوازيتين. السكين مائل أكثر من الحاجة. حافة السكين غير نظيفة. القطاعات سميكة. ساحة القطاعات القالب أقل من واجهة القالب الشمعي السكين مائلةكثيرا إلى األمام. السكين غير مشحوذة بالشكل الجيد. السكين المستخدم من النوع اللين حرارة الغرفة مرتفعة السكين غير مائلة بالشكل الكافي وجود شظايا من الشمع على طرف السكين أو الطرف العلوي للقالب التصاق القطاعات بالقالب الشمعي 94

96 المشكلة القطاعات غير متجانسة انشطار الشريط الشمعي المسببات سكينة القطع غير مثبته بالكامل أو القالب غير مثبت تماما على حامله. وجود خدش في حافة سكينة القطع أو وجود أوساخ أو أجزاء صلبة في الشمع أو الخزعة النسيجية. قاب الشمع غير منتظم األضالع أو األضالع المتقابلة غير متوازية. شريط شمعي غير مستقيم تجعد القطاعات سقوط القطاعات النسيجية من الشمع المحيط بها صعوبة عمل قطاعات نسيجية عدة أسباب منها : 1 تم تبريد الشمع المنصهر ببطء أثناء صب القالب الشمعي. 2 زاوية انحناء السكينةكبيرة والزاوية هنا الحاصلة بين محور السكينة الطولي وبين الخط الوهمي الذي يمر بموازاة حركة القالب. وتتراوح الزاوية ما بين 5621 درجة ويعتمد ذلك على نوع العينة وسمك القالب فكلماكان القالب أرق قلت الزاوية. تبريد العينة وإحاطتها بشمع البرافين المتجمد أثناء نقل العينة من الشمع المنصهر وتحضير القالب الشمعي. وكما يمكن حصول نفس المشكلة إذا ما تمت عملية تحضير القالب باستخدام شمع بارد على وشك التجمد أو إذاكان الشمع أكثر سخونة من المطلوب أثناء التخلل. عدم التخلص من الكحول أثناء عملية الترويق. 95

97 :(Slide تحضير بعض الشرائح المستديمة Permanent( عمل شريحة من بطانة الخد األدوات شرائح زجاجية مثبت) 2 %(حمض الخليك حامدددلة شرائح ماء مقطر صبغة الصفرانين أو اليود ماصات مجهر ضوئي خطوات 1 تنظيف الشريحة الزجاجية. العمل 2 عمل مسحة باإلصبع من بطانة الخد ثم وضعها على الشريحة. 3 تجفيف الشريحة بالهواء. 4 التثبيت بوضع قطرات من حمض الخليك ( 3 5 ) دقائق. 5 إضافة قطرات من الصبغة من )5 11( دقائق 6 غسل الشريحة بلطف بالماء. 7 تجفيف الشريحة بالهواء. 8 فحص العينة بالمجهر ثم تغطيتها ببلسمكندا والغطاء الزجاجي. 9 افحص المسحة التي قمت بعملها وتبين مكوناتها مستخدما العدسة )4( ثم العدسة )11( شريحة للنسيج الضام الفجوي 1 األدوات خطوات العمل شرائح زجاجية ماء مقطر مجهر ضوئي أرنب ألخذ النسيج تحت الجلد فورمالين زيلول كندا بلسم كحوالت تصاعدية صبغة ايوسين صبغة الهيماتوكسلين يؤؤخدذ 3 ملدم مدن هدذا النسديج الموجدود تحدت الجلدد بمقدص حداد ثدم يفدرد علدى شدريحة بواسطة إبرتي تشريح. 2 يثبت بالفورمالين % 11 لمدة 115 دقائق. غسلي بالماء المقطر. 3 يصبغ بصبغة الهيماتوكسلين لمدة 5 دقيقة. 4 يغسل بالماء الجاري لمدة 11 دقائق للترويق. 5 يغسل بالماء المقطر. 96

98 6 يصبغ بصبغة االيوسين لمدة دقيقتين. 7 8 يغسل بالماء المقطر. يمرر في كحوالت تصاعدية. 9 يروق بالزيلول وتغطى بالكندا بلسم والغطاء الزجاجي. 01 شريحة للنسيج الدهني األدوات بعد ذلك يفحص النسيج لمشاهدة أليافه المختلفة وخالياه. دجاجددة أو أرنددب للحصددول علددى النسدديج الدددهني صددبغة سددودان فورمددالين 11 %كحددول 71 %كحول 81 %كحول %91 ماء مقطر جلسرين الخطوات يفرد النسيج الدهني على شريحة زجاجية. يوضع على النسيج فورمالين %11 للتثبيت لمدة 11 دقائق. تغسل بماء مقطر إلزالة الفورمالين الزائد. توضع صبغة سودان على النسيج. تمرر الشريحة بتركيزات تصاعدية مدن الكحدول لمددة دقيقتدين فديكدل تركيدز للدتخلص من الصبغة. تغسل بماء مقطر. تجفف بورقة ترشيح بحرى وعناية يوضع عليها الجلسرين ثم غطاء الشريحة. تحضير سحبة من الدم إبر وخز قطن معقم +كحول )مسحة طبية ) حامدددلة شرائح )شبك( األدوات شرائح زجاجية مجهر ضوئي ميثانول )%95( صبغة ليشمان,جيمزا أو رايت + محلول منظم ماء مقطر ماصات. 97

99 1 تنظيف الشريحة الزجاجية جيدا. 2 تعقيم اإلصبع بالكحول االيثيلي )%71( 3 وخز األصبع باإلبرة المعقمة. 4 مسح القطرة األولى من الدم بالقطن المعقم. 5 ضع قطرة صغيرة قرب حافة الشريحة )انظر الشكل( 6 ضع حافة شريحة أخرى بزاوية حادة )45 ) على طرف الشريحة األولى لتنتشر عليها نقطة الدم. 7 اسحب الشريحة الثانية على األولى بسرعة لتكوين المسحة. 8 تجفيف الشريحة بتحريكها في الهواء. الخطوات لتثبيت و صبغ الشريحة يجب إتباع الخطوات التالية : األدوات والمحاليل المستخدمة خطوات العمل حوض خاى بالصباغة,ماء مقطر,كحول ميثلي,محلول صبغة رايت Stain( )Wrights محلول منظم ) Buffur (درجة حموضته) 6,5 ( طريقة الصباغة :بعد أن يتم تحضير فلم الدم المناسب )كما مر سابقا ) و قبل تغطيته بغطاء الشريحة يمكن صباغته بإتباع الخطوات اآلتية : اترك الفلم جانبا ليجف, أو جففه بتحريكه بسرعة و على بعد 5 سم من لهب بنسن, ثم ضع الشريحة فوق حوض الصبا. ثبت الفلم على الشريحة باستخدام محلول التثبيت ( الكحول الميثيلي ) مدة ) 3 د 5 ( دقائق, و ذلك بإضافة بغض قطرات من الكحول إلى الفلم. امزج حجما واحدا من محلول أزرق الميثيلين و حجمين من المحلول المنظم )Buffer( أو الماء المقطر. اغمر الشريحة في المزيج المحضر في البند )3(,ثم اتركها مدة )5 11( دقائق. اغسل الشريحة بالمحلول المنظم ( Buffer ) أو بالماء المقطر. اغمر الشريحة في محلول رايت المخفف stain( ( Wrights مدة )11( دقائق

100 7. اغسل الشريحة بالماء المقطر, و اتركها تجف في درجة حرارة الغرفة. غط الشريحة بغطائها الخاى, بعد وضع قطرات من بلسمكندا تحت الغطاء Cover( ) حتى يحفظ الشريحة. ثم ثبت بطاقة صغيرة على حافة الشريحة و اكتب عليها اسم العينة, و تاريح تحضيرها. و بذلك تكون قد حصلت على شريحة دائمة يمكنك أن تشاهد فيها تحت المجهر ما يأتي: 1 خاليا الدم الحمراء : تظهر بلون احمر مصفر. 2 نويات خاليا الدم البيضاء : تظهر بأشكال عدة, وبألوان مختلفةكما هو موضح أدناه : أ نويات الكريات البيضاء الحمضية ( Eosinophils ) بلون احمر مائل البرتقالي ب نويات الكريات البيضاء القاعدية )Basophjls( بلون ارجواني مائل إلى األسود ج نويات الكريات البيضاء الليمفية ( )Lymphocyts بلون ارجواني داكن, و السيتوبالزم بلون أزرق فاتح. د نويات الكريات البيضاء المتعادلة Neutrophils( ). 3 الصدفائح الدمويدة )Thrombocytes) تبددوكحبيبدات مدا بدين بنفسدجية إلدى أرجوانية اللون. دراسة فصائل الدم : مجهر التحضير مصل مضاد لفصيلة الدم A مصل مضاد B شرائح و أغطيه دبابيس معقمه خطوات العمل نضع نقطتين دم المراد تحديد فصيلته على طرفي شريحة زجاجية نضيف إلى النقطة األولى مدن مصدل مضداد A أي مصدل يحتدوي علدى األجسدام المضدادة A ونقلب نضددديف إلدددى نقطدددة الددددم الثانيدددة قطدددرة مدددن مصدددل مضددداد B أي يحتدددوي علدددى األجسدددام المضادة B ونقلب نالحظ حدوث التصاق ( تجمع ) كرات الدم الحمراء ونحدد الفصيلةكما مبين بالرسم 99

101 تحضير المسحة : ( أ ) ضع قطرة دم صغيرة على سطح شريحة زجاجية نظيفة بالقرب من الحافة القصيرة اليمني للشريحة. ( ب ) ضع أحدى الحافتين القصيرتين لشريحة زجاجية ثانية على يسار قطرة الدم بزاوية )31( درجة تقريبا. ( ج ) أسحب الشريحة الثانية إلى اليمين حتى تالمس قطرة الدم, وعندها ستنتشر قطرة الدم, وعندها ستنتشر قطرة الدم على حافة الشريحة الثانية. )د ) أدفع الشريحة الثانية يسارا وبسرعة حتى النهاية اليسرى للشريحة األولى )دفع الشريحة الثانية ببطء قد يؤدي إلى تركيزكريات الدم البيضاء على حواف الشريحة( صبغ المسحة ( أ ) دع المسحة التي تم تحضيرها لتجف ثم أغمر المسحة بصبغة ليشمان )ب( بعد )21( ثانية خفف تركيز صبغة ليشمان على الشريحة الزجاجية بضعفكميتها من الماء المقطر مع تحريك الشريحة بطريقة تأرجحية. ( ج ) أترك الشريحة على حالها هذا لمدة )118( دقائق ثم أغسلها بسرعة بالماء المقطر. ( د ) جفف الشريحة بمسكها في وضع رأسي أو بورق مرشح ثم أفحص تحت المجهر. النتيجة ( أ (كريات الدم الحمراء: بنية مصفرة )ب( حبيبات الحمضيات : حمراء ( ج( حبيبات العدالت : بنفسجية محمرة ( د ) حبيبات القعدات : أرجوانية 100

102 )هد( الصفيحات الدموية : أرجوانية 101

103 إعداد مقطع في عظمكثيف ( بواسطة البرد ) الخطوات 1 يغسل العظم )الطويل( بالماء والصابون. 2 بأقل سمك ممكن ) 1 مم( احصل على مقاطع عرضية أو طولية. 3 يتم برد المقاطع بصنفرة خشنة وفي اتجاه واحد حتى تصبح رقيقة. 4 تفحص تحت المجهر للتأكد من ظهور ووضوح التفاصيل. 5 ينزع الماء من المقطع بسلسلة تصاعدية من الكحول االيثيلي )53( دقائق لكل خطوة. 6 توضع في الزيلول للترويق )75( دقائق 7 توضع المقاطع على شرائح زجاجية نظيفة وتغطى ببلسمكندا والغطاء الزجاجي ثم تجفف بالفرن عند درجة) 37 (. اعداد مقطع في عظم كثيف ( بواسطة نزع أمالح الجير( 102 الخطوات 1 قبل الشروع في نزع الكلس " أمالح الجير": يجب أن يتم تثبيتها بالفورمالين المنظم لمدة (48( ساعة وهذه هي المرحلة األولى للتثبيت. 2 يوضع العظم في أحماض من أجل نزع الجير وهناك نوعين من األحماض المستخدمة: أ أحماض قوية مثل حمض Hcl( (وينقع العظم به لمدة يومين. ب أحماض ضعيفة مثل حمض الخليك وينقع العظم بعه لمدة أسبوع حتى ينزع الكلس. مالحظة : * يمكن االستدالل على استكمال عملية نزع الكلس من النسيج عندما تصبح لينه وسهلة القطع بواسطة المشرط. * يجب تغيير المحلول أثناء عملية إزالة الكلس مرةكل )4824( ساعة 3 يغسل العظم جيدا بالماء. 4 ينزع الماء باستخدام تراكيز الكحول التصاعدية للتخلص من بقايا المحلول الحمضي حيث بقاء الحموضة في النسيج من شأنه أن يؤثر على عملية الصبغ لمدة ساعتين لكل تركيز من الكحول للعظم الصغير و) 12 ( ساعة لكل تركيز للعظام الكبيرة. 5 يتم ترويق العينة وذلك بوضعها في محلول منكميات متساوية :1 1 من الكحول االيثيلي المطلق ومادة الزيلول وذلك حتى يتم التخلص من الكحول االيثيلي ألنه ال يذوب في الشمع ويترك لمدة )12( ساعة أو ساعتين ثم ينقل إلى زيلول نقي لمدة )12( ساعة أيضا.

104 مالحظة : وهنا يمكن عمل قطاعات رقيقة جدا من العظم يدويا طوليا أو عرضيا ووضعها على شريحة وصبغها بالهيمات وكسلين وتغطيتها ببلسمكندا ثم يوضع غطاء الشريحة وتفحص. 6 يتم تشريب العينة بالشمع وذلك بصهر الشمع في حمام مائي أو فرنكهربائي عند درجة حرارة ) 61 م 4 ) وتوضع عينة العظم في الشمع السائل لمدة ساعتين. 7 يصهر شمع نقي آخر عند نفس الدرجة ثم يصب في قوالب الشمع وتوضع به العينة وتذاب بشكل جيد على حسب الغرض من الدراسة طوليا أو عرضيا ثم تطمر بكمية من الشمع,ثم ينفح السطح العلوي حتى يتصلب بعض الشيء ثم تغمس في وعاء به ماء عند درجة حرارة الغرفة الن الماء البارد يتسبب في تشقق الشمع ويوضع عالمة على الجزء المراد إظهاره بقطاعات. يتم معالجة قالب الشمع بالطرق السابقة التي ورد ذكرها في خطوات التحضيرات المستديمة للحصول على قطاعات رقيقة جدا ( التقطيع التحميل على شرائح الصبغ التغطية(. تحميل الحشرات أو أجزاء منها الخطوات 1 تنزع أجزاء من الحشرة)قرن استشعار رجل جناح أجزاء الفم( أو الحشرة الصغيرة كاملة. 2 تمرر في سلسلة تصاعدية من الكحول االيثيلي )115( دقائق لكل خطوة. 3 توضع في الزيلول للترويق حتى تصبح شفافة. 4 بعد ذلك توضع على شرائح زجاجية نظيفة وتغطى ببلسمكندا والغطاء الزجاجي. 5 تجفف بالفرن عند درجة) 37 م 4 (. 103

105 تحضير القطاعات النباتية: األهداف: 1 لمعرفة آلية عمل مقطع يدوى واختباره بالميكروسكوب الضوئي. 2 التمييز بين أشكال الخاليا فيكل من الساق والجذر واألوراق. 3 لدراسة آلية الكشف عن معظم المركبات في الخاليا. ومن خالل دراسة المقاطع المصبوغة سنتعرف على أشكال األنسجة أوال : محاليل حفظ العينات: المختلفة: 1 محلول التثبيت F.A) (Formalin Acetic Acid glacial)) A. يستعمل لحفظ عينات الجذور والسيقان واألوراق والقمم النامية ويتكون من: )5( مل حمض خليك ثلجي )91( ملكحول ايثيلي ( %71 ) )5( مل فورمالين الوقت المتبع في حالة هذا الحافظ )18( ساعة )5( مل حمض الخليك مطلق )%111( 2 محلولكارنوى : ) 31 (ملكحول ايثيلي )5( ملكلوروفورم يستخدم للعينات الرقيقة كقمة جذرا أو أجزاء الزهور مدة التثبيت: ساعة واحدة مالحظات: 1 ال يزيد حجم العينة عن )5 1( سم 2 أن يكون المثبت عشر أضعاف حجم النسيج على األقل 3 مراعاة مدة المثبت. 104

106 ثانيا : التحضير: هناك ثالث مراحل أساسية لتحضير مقطع يمكن استخدامه في دراسة األنسجة أو المقارنة بينها: الحصول على المقطع: يجب محاولة الحصول على مقطع رقيق جدا ويجب أن تكون عملية القطع عمودية على الجزء النباتيكما يظهر في الشكل: خطأ صح من أجل القطع اليدوي والحصول على ارق المقاطع الممكندة دون تمدزق األنسدجة النباتيدة, يجدب اسدتعمال مدادة خاصدة قلدب نبدات البيلسدان The Pith of Elder Tree وهدو مدن أنجدع المدواد المسدتعملة وهددف اسددتعمال هددذه المددادة هددو الددتحكم فددي الجددزء النبدداتي وعدددم تشددويه المقطددع, يمكددن أيضددا اسددتبدال هددذه المددادة بمواد مناسبة تقوم بنفس العمل مثل الفلين أو البوليستر ) Polystyrene (أو البطاطس أو الجذر. طريقة االستعمال تكون على النحو التالي: الطريقة اليدوية: أغسل العينة بالماء الجار لترطيبها. أزل األجزاء الطرفية ليستوي سطح العينة. خذ قطعة من مادة البوليستر وأقسمها قسمين احفر في القسمين حفرا مناسبا تماما لحجم المقطع النباتي المراد استعماله ضع الجزء النباتي داخل الفتحة التي أعدت له أغلق الجزئيين وبواسطة شفرة أو موس حاد اقطع ارق جزء ممكن )15 إلى 21 ميكدرون( مراعيدا أن تكون الشفرة عمودية على المقطعكما يظهر في الرسم: انقل القطاعات إلى زجاجة ساعة تحوى ماء و بواسطة الفرشاة اختبر ارق القطاعات وإمدا تفحدص بالمداء مباشرة أو هناك آليات صباغة سنتعرض لها قلب نبات البيلسان مقسم قسمين من الوسط. الجزء النباتي يوضع في مكان الحفر المعدلة. عملية القطع عمودية على المقطع. 105

107 الصبغ: ممكن أن نستخدم صبغة واحدة أو أكثر من صبغة وسنتعرض إلى عدة طرق صباغةكاآلتي: الصباغة بصبغة واحدة: يعد تجهيز المقاطع كما سبق,يتم نقلها من وعاء الماء إلى زجاجة بها صبغة ( Toluidine blue) وتصبغ لمدة )15( ثانية. انقل العينة مباشرة إلى وعاء به ماء للغسيل. حمل على شريحة نظيفة. ممكن التحميل بالماء أو بواسطة وسط تحميل آخر كالجليسرين. هناك صبغات تتناسب مع بعض المكونات في الخاليا مثال: 1 النشأ (IkI) لمدة )15( وهو متكون من أيود يد البوتاسيوم )%2( + محلول مائي لليود :(Starch) اغمس المقطع في )% 1.2( يغسل المقطع في الماء ثم يحمل بالماء أو الجليسرين. black) ) Naphthol blue لمدة دقيقة. B لمدة دقيقة. 2 البروتين (Protein) : يغمس المقطع في ينقل إلى) %7 ( حمض خليك. ينقل إلى الماء ويحمل بالماء. 3 الدهون Lipids) :( يغمس المقطع في اسود سودان ينقل المقطع إلى %71 ايثانول. ينقل للماء ويحمل بالماء 4 اللجنين Lignin) :( يغمس المقطع في محلول فلورو جلوسينول من دقيقة إلى دقيقتين. ينقل إلى الماء ويحمل بالماء. : Callose IKI) (لمدة دقيقتين. 5 الكالوس يغمس في ينقل للماء ثم إلى االنيلين األزرق لمدة )5( دقائق. ينقل للماء ويحمل بالماء. 106

108 الصبغات المزدوجة Staining) (Double تستخدم الصبغات المزدوجة لصباغة األجزاء النباتية المختلفة في المقطع الواحد وذلك حسب طبيعدة تلدك األجزاء فمثال األنسجة البارانشمية تتلون باللون األخضر بينما األنسجة الملجنية باللون األحمر لون السفرانين. ممكدددن اسدددتخدام عيندددة محفوظدددة فدددي كحدددول )%71( أو طازجدددة وسنسدددتخدم طريقدددة الصدددباغة باسدددتخدام صبغة السفرانين )Safranine( وصبغة األخضر الخفيف Green) )Light 1 تنقل العينات الطازجة من الماء إلى زجاجة ساعة بها ) 31 %(كحول. 2 تنقل العينات إلىكحول بتركيز )%51( مدة ثالث دقائق. 3 تغمس العينات في صبغة السفرانين لمدة )73 ) دقائق 4 تنقددل العينددات داخددل تركيددزات مدددن الكحددول مختلفددة )%71( لمدددة )3( ثددوان, )%81( لمددددة )3( ثوان,) 91 %(لمدة )3( ثوان 5 تغمس القطاعات في صبغة األخضر الخفيف )53( ثوان 6 تنقل إلىكحول )%95( لمدة )3( ثوان 7 كحول مطلق )%111( لمدة 5 ثوان 8 كحول مطلق + زيلول )1:1( لمدة )3( ثوان 9 زيلول لمدة )5 ) ثوان فقط 11 تحمل العينات علىكندا بلسم وبذلك يتم الحصول على شرائح دائمة. 107

109 االنقسام غري املباشر تحضير شرائح لدراسة مراحل االنقسام الميتوزي )غير المباشر(: واالنقسام الميوزي )االختزالي(: تعتبدر األنسدجة المريسدتيمية مثدل القمدم الناميدة للجدذور وبدراعم األوراق مدن أفضدل المدواد لدراسدة االنقسدام الميتدوزي. بينمدا الخاليدا البوغيدة األميدة المدذكرة فدي الدذرة والقمدح والشدعير وكدذلك البدراعم الزهريدة فدي النباتدات ذوات الفلقتين من أفضل المواد لدراسة االنقسام الميوزي. طريقة تحضير شريحة لدراسة مراحل االنقسام الميتوزي: :(Slide شريحة مستديمة Permanent( الطريقة: :)Cultivation( مرحلة الزراعة 4 (سم. 1 ينمي البصل في الماء في درجة حرارة الغرفة حتى يصل طول الجذور حوالي )3 :)Fixation( مرحلة التثبيت 2 أقطع المناطق الطرفية )المريستيمية( من الجذور النامية )5 1 1 (سدم ثدم ضدعها فدي مثبدتكحدولي )3( أجزاءكحول ايثيلي : )1( جزء حمض خليك ثلجي( لمدة )24( ساعة. )الغدرض األساسدي مدن عمليدة التثبيدت هدو القتدل المفداجئ للنسديج بددون أي تشدوه لمكوندات الخليدة المدراد دراستها أي أنه يعمل علي وقفكل العمليات واألنشطة الحيوية بداخل الخلية( 3 أغسدددل بالمددداء مدددن )32( مدددرات,ويمكدددن حفدددظ العيندددات فدددي الثالجدددة بعدددد وضدددعها فددديكحدددول )%71( لحين االستعمال. 108

110 :)Hydrolysis( مرحلة التحلل المائي 4 تعامدل الجدذور بدد )1 عيداري ) حدامض الهيددروكلوريك عندد درجدة حدرارة ) 61 م 4 (لمددة حدوالي )65( دقدددائق. وتسدددمي هدددذه العمليدددة بالتحلدددل المدددائي ) Hydrolysis )فهدددي تسددداعد علدددي تفكيدددك الدددروابط البروتوبالزمية وتليين الجدر الخلوية وبالتدالي يسدهل هدرس هدذه الجدذور وفدرد النسديج النبداتي, وظهدوره فدي صورة صفوف من الخاليا غير متراكبة فوق بعضها البعض. :)Staining) مرحلة الصبغ 5 ضددع الجددذور فددي صددبغة الفوكسددين القاعدددي Fuchsine) )Basic )فددولجن )Feulgen وهي صبغة خاصة بصبغ الكروموسومات فقط أي مادة الد (DNA( لمدة )3 4 ) ساعات. 6 أقطع القمدة الناميدة المصدبوغة للجدذر أي المنطقدة المريسدتيمية )حدوالي 2 ملدم( علدي شدريحة زجاجيدة نظيفة جافة في قطرة من )%45( حامض خليك ثلجي. :(Squashing( مرحلة الهرس أهرس الجزء المريستيمي باستخدام اإلبرة للحصول علي مجموعة من الخاليا. 7 8 أصدنع فديلم رقيدق غيدر معدتم مدن زالل البديض علدي غطداء الشدريحة ثدم ضدع الغطداء علدي العيندة النباتيدة وأضغط برفق بين طيات ورق الترشيح النتشار الخاليا وطرد فقاعات الهواء. 9 سخن الشريحة علي لهب هادئ. الحظ عدم غلي الشريحة. مرحلة نزع الماء :(Dehydration) ضددع الشددريحة فددي طبددق بتددري يحتددوي علددي )%41( كحددول بحيددث يكددون غطدداء الشددريحة متجهددا إلددي أسفل )مقابل للكحول( حوالي) 11 15( دقيقة حتى ينفصل غطاء الشريحة عن الشريحة. مرركال من غطاء الشريحة والشريحة في سلسلة من الكحوالت وذلك لنزع الماء من العينة النباتية 51(,% 61,% 71,% 81,% 96,% مطلددددق(كددددال لمدددددة )2( دقيقدددددة ثددددم فددددي المحاليدددددل التالية:

111 كحول مطلق : زيلول, 1 : 3 كحول مطلق : زيلول, 1 : 1 كحول مطلق : زيلول, 3 : 1 ثم زيلول فقطكال لمدة )5( دقائق. :) Mounting ( مرحلة التحميل 13 حمدل العيندة النباتيدة بوضدع قطدرة كنددا بلسدم علدي الجدزء الدذي تدم تحضديره علدي الشدريحة ثدم ضدع غطداء نظيف. 14 ضع الشريحة المجهزة التحضير في فرن درجة حرارته )35 41 (م 4 حتي يتم جفافها. : )Examination ( مرحلة الفحص 15 أفحص التحضير بواسطة الميكروسكوب مستخدما القوة الصغرى الكبرى. ثم 16 حدد األطوار المختلفة لالنقسام غير المباشر. 110

112 التشريح 111

113 علم التشريح: هو العلم الذي يبحث في تركيب جسم الكائن الحي ويقسم إلى : علم التشريح الكلي : ويختص بدراسة الشكل الخارجي لعضو ما في جسم الكائن الحي باستخدام العين المجردة علم التشريح المجهري : ويختص بالدراسة المجهرية التفصيلية لعضو ما في جسم الكائن الحي. الهدف من التشريح: التعرف على الشكل الخارجي والبنيان الداخلي و الوقوف عند تنوع وتركيب الكائنات الحية. قواعد عامة في التشريح: أقرأ تعليمات التشريح جيدا قبل البدء بعملية التشريح. حضر األدوات والمواد الالزمة للعمل قبل البدء بالتشريح. حافظ على الماء نظيفا في حوض التشريح, واستبدلهكلما تغير لونه حتى تبقى الرؤيا واضحة. استخدم ملقطا لوقف النزيف إذا حدث وانقطع وعاء دموي في أثناء التشريح. احذر عند التعامل مع مادة الكلوروفورم وال تحاول استنشاقها. تثبت الحيوانات الفقريةكاألرنب عند تشريحها على الناحية الظهرية مدن الجسدم ونبددأ بفدتح الجسدم مدن الناحية البطنيدة بينمدا يثبدت الحيدوان الالفقداري علدى الناحيدة البطنيدة مدن الجسدم ونبددأ بدالفتح مدن الناحيدة الظهرية. عند تثبيت الحيوان بالدبابيس في طبق التشريح تكون الدبابيس في وضع مائل إلى الخارج. عندد تشدريح أيكدائن حيدواني فأنده يقدص الجلدد أو لتظهدر لددينا العضدالت )اللحدم (ثدم تقدص العضدالت وبعض العظام فتظهر لنا األحشاء. عنددد تشددريح األعضدداء واألوعيددة الدمويددة واألعصدداب نجددد أنهددا تتصددل مددع بعضددها بأنسددجة رقيقددة ويجددب إزالتها بحذر شديد حتى تكشف عن التراكيب المطلوبة. 112

114 الدمويدة واألعصداب يكدون ذلدك علدى طدول األوعيدة الدمويدة أو األعصداب عند تشريح األعضاء واألوعية ال بعرضها. أدوات التشريح : عمليددة التشددريح عمليددة دقيقددة تددتم حتددى نسددتطيع التعددرف علددى التركيددب الددداخلي ألجهددزة الكددائن الحددي ودراسددتها وهددذه العمليددة يلزمهددا بعددض األدوات المعينددة حتددى تددتم بطريقددة صددحيحة وهددذه األدوات البددد مدددن حفظها في علبة خاصة وهي: المشارط, المقصات, مالقط, إبرة التشريح, دبدابيسكبيدرة وصدغيرة, زجاجات الساعة, طبق تشريح, لوح التشريح. فرشدة صدغيرة, موسدى التشدريح, 113

115 تشريح بعض الحيوانات أو أجزاء منها النقل والجهاز الدوري الدموي طبق أو لوح تشريح مشرط قضيب زجاجي أو عود خشبي. األدوات الالزمة: قلب ماعز أو خروف خطوات العمل: 1 أنزع غشاء التامور ثم أقطع األوعية الدموية الرئيسية التي تترك القلب أو تصب فيه قريبا من قواعدها. 2 خذ القلب بعد ذلك وضعه في طبق التشريح بحيث يواجهك جانبه البطيني. 3 اقطع طوليا في جدار البطين حتى تصل إلي حزام الدهن, ثم عرضيا و موازيا لذلك حزام الدهن,ثم عرضيا و موازيا لذلك الحزام و لبعض المسافة عل جانبي هذا المقطع الطولي. 114

116 الجهاز الهضمي األدوات الالزمة: أرنب لوحة تشريح خشبيةكلوروفورم مخبار جمع غازات بغطائه مجموع أدوات تشريح قطن طبي شرائح زجاجية مسامير رفيعة طويلة و مطرقة خطوات العمل: 1 نخدر الحيوان بوضع قطعة قطن مشبعة باألسيتون مثال أو الكلوروفورم على فمه وانفه حتى تهدأ حركته, نستمر قليال ليموت الحيوان نبعد القطن عنه أثناء العمل,ونتخلص منه بعد التخدير بوضعه بعيد عنا. 2 غسل األرنب حتى ال يتطاير الشعر أثناء التشريح إذا كان مذبوح. 3 يوضع األرنب المخدر على لوحة التشريح على ظهره و تثبت أطرافه بالمسامير. 4 نزيل الفرو عن نهاية بطن الحيوان بقصه بالمقص الطائر ثم ندخل أحد رأسي المقص عبر جلد البطن ونبدأ بالقص باتجاه رأس الحيوان في منتصف البطن, نالحظ أننا سوف نكسر جميع األضالع. 115

117 5 نثبت الجلد من الناحيتين على لوح التشريح باستخدام بعض المسامير ونحاول أن تكون الفتحة التي عملتاها في البطنكبيرة بإبعاد جانبي الجسم وتثبيتهماكذلك بمسامير على لوح التشريح. 6 نقطع عضالت البطن عند الخط الوسطى بداية من منطقة الحوض حتى القفص الصدري ثم نعمل قطعين جانبيين في هذه العضالت ونثبتها على الجانبين. 6 نفرد أجزاء الجهاز الهضمي بحرى ونثبت كل جزء نفرده على لوح التشريح باستخدام الدبابيس ونفحص أجزاء الجهاز الهضمي جيدا. 116

118 الجهاز التنفسي طبق تشريح قفازات عدسة مكبرة منفاخ األدوات الالزمة: رئة خروف أو ماعز سكين أو مشرط هواء. خطوات العمل: ضع الرئة في طبق التشريح ثم افحصها من الخارج. 1 استخدم المنفاخ لنفح الرئتين بعد وضعه 2 االحتياطات: في أعلى القصبة الهوائية للمقارنة بين الشهيق والزفير. لتشريح الرئة والتعرف على مكوناتها استخدم المشرط والعدسة المكبرة. عدم استخدام الفم في نفح الرئتين. جهاز اإلخراج ( الجهاز البولي ) طبق تشريح قفازات الالزمة: األدوات كلية خروف أو ماعز سكين أو مشرط خطوات العمل: 1 ضع الكلية على طبق التشريح لفحصها ظاهريا من حيث شكلها العام لونها وطولها و عرضها 2 شق الكلية شقا طوليا من جهتها المحدبة والمقعرة ثم الحظ الغشاء الخارجي الذي يحيط بها )كبسولة( المنطقتان الخارجية والداخلية من حيث ضيقها أو عرضها لبروزات في الجزء الداخلي. 117

119 الجهاز العصددددددددددبي طبق تشريح قفازات األدوات الالزمة: رأس خروف أو ماعز تم نزع الجلد منه سكين حادة خطوات العمل: 1 قم بإزالة الجمجمة مع مراعاة عدم تهتك. أنسجة الدما 2 ضع الدما على طبق التشريح لمالحظة شكله الخارجي. 3 استخدم المشرط أو السكين للتعرف على تركيبه وتحديد موقعكل جزء. االحتياطات 1 عند إزالة الجمجمة يجب الحذر من تطاير العظام الرقيقة على العينين. 2 أنسجة الدما أنسجة سريعة التهتك لذلك ينبغي الدقة أثناء القيام بإزالة الجمجمة. األسماك وتركيبها الداخلي األدوات الالزمة: سمكة طازجة ( بلطي مثال ), لوح تشريح, دبابيس, أدوات تشريح ( مقص, ملقط ) خطوات العمل: 1 نفحص التركيب الخارجي للسمكة قبل القيام بعملية التشريح. 2 نضع السمكة على جنبها ونفحص الجزء البطني للسمكة سنجد في نهايته قرب الذيل فتحة الشرج 118

120 3 ندخل رأس المقص في فتحة الشرج بحيث يكون المقص موازيا للوح التشريح,نبدأ في قص الجانب ألبطني للسمكة باتجاه الرأس إلى أن نصل إلى عظم صلب تحت الرأس. 4 أدخل المقص مرة أخرى في فتحة الشرج وفي هذه المرة يكون المقص عموديا على لوح التشريح, ونقطع في جسم السمكة من فتحة الشرج إلى منتصف الجسم ( هناك خط ينصف جسم السمكة يبدأ من الذيل إلى الرأس ) نستمر في القص إلى أن نتجاوز منتصف الجسم بقليل. 5 نرفع الجزء الذي تم قطعة من جسم السمكة باليد أو بملقط ثم نستخدم المقص لقطع هذا الجزء تماما والتخلص منه وذلك بالقص من منتصف الجسم باتجاه الرأس نبعد هذا الجزء تماما و سيكشف لنا بطن السمكة. 6 نستخدم الملقط برفق لفرد أجزاء الجهاز الهضمي على لوح التشريح ونستخدم الدبابيس الصغيرة لتثبيت أجزاء الجهاز الهضمي على لوح التشريح نفحصكذلككيس العوم. 7 يمكن قص أجزاء من الجهاز الهضمي لفحص داخلها وكذلك كيس العوم. االحتياطات : يجب أن نراعي أثناء القص عدم إدخال رأس المقص كثيرا في البطن حتى النقطع األمعاء أوكيس العوم. 119

121 الطيور وتركيبها الداخلي لوح تشريح دبابيس أدوات تشريح ( مقص, ملقط ( األدوات الالزمة: طائر حي )حمامة أو دجاجة ) مسامير أنبوب للنفح مطرقة صغيرة عدسة مكبرة. خطوات العمل: 1 افحص الطائر جيدا والحظ أجزاءه الخارجية. 2 خذ ريشة من جناح الطائر وافحصها جيدا. 3 ضع نقطة ماء على الريشة...ثم حاولكسر الريشة باليد. 4 نخدر الطائر بوضع قطعة قطن مشبعة باألسيتون على منقاره حتى تهدا حركته نستمر قليال ليموت الطائر نبعد القطن أثناء العمل. 5 ضددع الطددائر علددى لددوح التشددريح علددى ظهددره, نفددرد الجندداحين ونثبتهددا علدى لدوح التشدريح باسدتخدام المسدامير والمطرقدة ثدم نفدرد القددمين بعيددا عن الجسم ونثبتكل قدم بمسمار بين األصابع. 6 نزيل الدريش عدن نهايدة بطدن الطدائر ثدم نددخل أحدد رأسدي المقدص عبدر جلد البطن يمين فتحة الشرج وأعلى منها قليال ونبدأ بدالقص باتجداه رأس الطدائر, نالحدظ أنندا سدوف نكسدر جميدع األضدالع بدالمقص حتدى ننتهدي إلى عظم صلب نسدبيا فدي أعلدى الصددر وسديحتاج كسدرة إلدى بعدض القدوة ندددخل المقددص فددي الجهددة الثانيددة مددن الددبطن ونقددص األضددالع مددن الجهددة األخدددرى. سدددنجد فدددي النهايدددة أن عظدددم وعضدددالت الصددددر قدددد انفصدددلت جسم الطائر وانكشف أمامنا تجويف الجسم. 7 نفدرد أجدزاء الجهداز الهضدمي بحدرى ونثبدت كدل جدزء نفدرده علدى لدوح التشريح باستخدام الدبابيس ونفحص أجزاء الجهاز الهضمي. 120

122 8 نقطدددع القصدددبة الهوائيدددة للطدددائر عندددد أعلدددى الرقبدددة بدددالمقص ثدددم نددددخل أنبوب الدنفح فدي القصدبة الهوائيدة وندنفح فيهدا برفدق ونالحدظ انتفداخ الدرئتين واألكياس الهوائية. 9 نفصل بعض العظام ( األضدالع وغيرهدا ونالحدظ وزنهدا ونحداول فحدص تركيبها الداخلي بعدسة مكبرة بعد كسر العظم. دددددددددددددددددددددددددددد االحتياطات : 1 التأكد من سالمة الطائر وفحصه جيدا قبل الشروع في العمل. 2 الرفق والحذر عند فحص الطائر. الجهاز التنفسي ( الحبار ) خطوات العمل: 1 اعمل قطاع طوليا في جدار البرنس البطني إلى جانب الخط الوسطي بقليل. 2 افتح القمع أيضا وذلك بان تقطع فيه قطع طولية ووسطية. 3 اقلب أرضيتي البرنس على الجانبين وثبتهما بدبابيس في حوض التشريح. 4 يتبن لنا بعد ذلك عدة أعضداء يمكدن فحصدها بددون تشدريح وذلدك عدن طريق شفافية الغشاء الرقيق الذي يغطيها. 5 نفحص الخياشيم وهي على الجانبين زوج من الخياشيم في تجويف البرنس. 121

123 الهيكل)الصدفة( في الحبار خطوات العمل: 1 أعمل قطاع طوليا في جلد ظهر السيبيا لنكشف عن الصدفة. 2 انزعها و ذلك بزحزحتها إ ىل األمام. 3 أفحدص الصدددفة و تبدين أنهدا مفلطحدة متماثلدة الجدانبين وخفيفدة جدددا, لها طرف أمامي مدور وخلفي أضيق يبرز على هي ة سن. 4 يحف بها من الجانب حيددانكالجنداحين تتركدب مدن صدفيحات جبريدة رقيقددة متعددددة و متراصددة بدددعضها بجددوار بعددض و توجددد فددددديما بينهددا حيددزات بينية. 122

124 تشريح الضفدع خطوات العمل: خدر الضفدعة بواسطة و خز دماغها بإبرة أو وضعها في إناء محكم الغلدق بده مدادة مخددرة أو أضدرب رأسدها بحافة المنضدة. 1 ثبددددت الضددددفدعة علددددى ظهرهددددا باسددددتخدام أربعددددة دبددددابيس تمسددددك بشكل غير مباشر في الساقين. 2 أرفددع الجلددد الواقددع بدين الفخددذين بددالملقط و أعمددل فتحدة صددغيرة فدي بواسدطة المقدص أو المشدرط, سدتالحظ خدروج سدائل شدفاف من تحت الجلد و هو سائل اللمف. 3 أقطع الجلد في المنطقة البطنية على امتداد الخدط النصدف طوليدا حتى االرتفاع الذقني. 4 5 أقطدددع الجلدددد طوليدددا بمحددداذاة كدددل طدددرف مدددن أطرافددده األربعدددة و أسحبه إلى الخارج. 123

125 يثبددت الجلددد بالدددبابيس ثددم تنظددف الضددفدعة و حددوض التشددريح بالمدداء ثددم تغمددر غمددرا جيدددا بالمدداء ثددم أكشددف الجلددد فستشدداهد عضدددالت الضدددفدعة واضدددحة أمامدددك و هدددي مغطددداة بغشددداء رقيدددق يعرف الصفق. 6 قص العضلة البطنية المستقيمة من أسفل إلى أعلى و أحذر حتى ال تلحق أضدرارا باألعضداء الداخليدة و خاصدة القلددب ثددم يقطددع الجددزء األيمددن و األيسددر مددن جدددار الددبطن و يسدحبكدل جددزء للخددارج و يثبددت بالدبابيس, فتظهر األحشاء الداخلية. و يمكن استخدام طريقة أخرى لقص العضلة البطنية. ( أنظر الصورة ) 7 124

126 تشريح األعضاء التناسلية خطوات العمل: يتم وضع األمعاء على جانب للتعرف على األعضاء التناسدلية و هدذه الصدور التاليدة مقارندة فدي حالدة الدذكر األنثى. و تشريح الجهاز العصبي إزالة الجهاز الهضمي, التناسلية, البولية لتسليط الضوء على الجهاز العصبي. 125

127 تشريح النبات تشريح النبات : يعندي دراسدة التركيدب الدداخلي لجسدم النبدات السداق والجدذر والورقدة وأجدزاء الزهدرة مدن حيدث أندواع الخاليدا واألنسدجة والتمييدز فيمدا بينهدا, وكدذلك العالقدة التدي تدربط بينهدا سدواءكاندت وظيفيدة أم شكلية. أساسيات الدراسة التشريحية في النبات: ال يمكدددن أن تدددتم الدراسدددة التشدددريحية فددي النبدددات إال باالسدددتعانة بدددأجهزة مسددداعدة لدراسدددة تلدددك التراكيدددب الداخليدة الدقيقدةكدالمجهر الضدوئي أو اإللكتروندي, أمدا دراسدة الشدكل الظداهري للنبدات فيدتم عدن طريدق الفحدص بالعين المجردة أو استعمال العدسات اليدوية. تشريح األزهار : األدوات : أدوات تشريح )مشرط ملقط ), عدسة,أزهار. خطوات العمل: للقيام بتشريح الزهرة نبدأ من الخدارج للدداخل مدع الحدذر والدقدة فدي العمدل حتدى ال تتهتدك أعضداء الزهدرة ونبدأ بفصل األجزاء واألعضاء الزهريةكالتالي: المحور التخت الكأس )سبالت( * التويج )بتالت( * * * التأنيث الكربلة * عضو التذكير الطلع )سداة( * عضو )قلم, ميسم,مبيض ) مع التأكيد على مدى المكونات األخرى. تدوفر مكوندات الزهدرة وعدددها والتحامهدا أو انفصدالها سدواء مدع بعضدها الدبعض أو مدع * باستخدام العدسة المكبرة يتم فحص جميع أجزاء الزهرة. 126

128 127

129 تعريف العينة : هي جزء من شيء أو موضوع, بحيث تكون ممثلة لخصائص ذلك الشيء أو الموضوع, وقد تكون حية كعينات األسماك في الحوض والنبات في المشتل وقد تكون ميتة كجزء من النبات كورقة مثال, وقد تكون عينة لجمادكعينات الصخور والمعادن والنقود والمالبس والسوائل. أنواع العينات : النوع األول : النددوع الثدداني : والذي ال يطرأ عليه أي تغيير في خصائصه كعينة األسماك في حوض األسماك وهددو مددا يطددرأ عليدده بعددض التغيددر فددي بعددض الخصددائص, نتيجددة لخطورتدده أو لندرتدده أو لصددعوبة االحتفاظ به مدة طويلة أو كذلك لسوء النظام الذي قد يحدث داخل الفصل, كعينة لثعبان أو لعقرب مثال. الهدف من حفظ العينات: يتم حفظ بعض أنواع الحيوانات والنباتات لدراستها عندما يتعذر الحصول على عينة منها وقت الحاجة. أقسام حفظ العينات الحية : حسب نوع الكائنات أوال حفظ العينات النباتية حفظا جافا : أحفظ العينات النباتية المسطحة )األوراق واألزهار ) 1 طريقة التجفيف بالضغددط: 1 يختار جزء مناسب من النبات فإذاكان النبات صغير الحجم يؤخذ بأكمله وإذا كان شجرة كبيرة يؤخذ فرع صغير به أوراق وأزهار إن وجدت. 2 ينظف من األتربة واألوساخ بمسحة بقطعة قماش نظيفة أو قطن نظيف. 3 تفرد األوراق المطلوب حفظها على لوح خشبي بين شريحتين من الورق النشاف )الماى( أو ورق الصحف ويوضع فوقه لوح خشبي مستوى آخر )يمكن استخدام جهاز خاى للضغط ) 128

130 4 نضع ثقل مناسب فوق المجموعة وذلك لضمان استواء العينة, ويترككذلك لعدة أيام حتى يتم التأكد من جفاف العينة. 2 طرق العرض: يؤخذ الجزء النباتي السابق بعد تمام جفافه 1 يلصق على لوحة من الورق المقوى بمادة الصقة ويغطى بورق شفاف تلصق حوافه بلوحة الورق المقوى. 2 نقطع الورق الالصق بواسطة المشرط من جميع األطراف كما هو واضح بالصورة تحفظ داخل البوم الصور حفظها داخل لوح من الزجاج)إطار الصور( كتب جميع البيانات الخاصة بهذا النبات)اسم العينة, تاريح جمعها, اسم الجامع( على لوحة الورق المقوى أسفل النموذج 3 طريقة التجفيف بتفريغ الهواء بواسطة) التغليف الحراري ) األدوات المستخدمة طريقة العمل 1 نحضر األوراق الالزمة للحفظ ولتكن أوراق الكزبرة, نفرد الورقة ونضعها وسط ورقة التغليف. 2 نضع ورقة التعريف على العينة. 129

131 3 نشغل جهاز التغليف الحراري ونتركه حتى يسخن جيدا, ثم نضع ورق التغليف بداخل الجهاز. 4 ننتظر خروج العينة من الجهة األخرى للجهاز, وبعد خروجها نضغط عليها حتى تبر خطوات استخدام آلة التغليف الحراري: تعليمات هامة عند القيام بعملية التغليف الحراري صل السلك بمصدر التيار الكهربائي. أدر قرى ضبط الحرارة إلى الدرجة المطلوبة. )ON( حول مفتاح التشغيل إلى الوضع انتظر بدء صدور اإلضاءة المتقطعة من مصباح االستعداد. ادخل الغالف البالستيكي برفق. عبر فتحة التغليف وال تتركيه حتى يكتمل إدخاله تقريبا. مالحظة : افصلي التيار الكهربائي قبل إجراء الصيانة أو إزالة الغالف العالق باآللة. ضع مخرج التغليف بعيدا عن الجدار,حتى تخرج الورقة مرتاحة. راع أن تكون العينة المراد تغليفها اصغر من التغليف قليال. عند بدأ التغليف راع اإلدخال من الجانب المغلق للغالفين. ادخل الغالف البالستيكي في الجهاز بحيث تكون في االتجاه الصحيح وغير مائلة. ال تشد الغالف البالستيكي أثناء التغليف,انتظر حتى تنتهي وحدها. قد تخرج الغالف البالستيكي المغلفة حارة جدا ال تلمسها حتى ال تتشوه واستقبلها على سطح مستوي. قبل البدء بعملية التغليف وبعدها, ادخل ورقة بيضاء خاليةكي تقوم بتنظيف الجهاز. مالحظة : يمكن استبدال هذا الجهاز بالمكواة الكهربائية. الحفظ بزيت الجلسرين تحفظ أوراق النباتات بزيت الجلسرين )بطريقتين ) 4 130

132 الطريقة األولى : يتم اختيار مجموعة من أوراق النبات. وضع مقدار من الجلسرين إلى مقدارين من الماء في إناء. تغمر أوراق النباتات داخل الجلسرين وتترك لمدة أسبوعين إلى ثالثة أسابيع. ترفع األوراق من الجلسرين وتمسح الطريقة الثانية : اختيار مجموعة من أوراق النباتات. دهن األوراق بزيت الجلسرين ( مع تكرار الدهنكل يومين ولمدة أسبوع ) تترك األوراق لمدة ثالثة أسابيع ثم توضع علي أطباق للعرض. مالحظة : هذه الطرق للحفظ تجعل األوراق طبيعية دون أن تتكسر مع تغير طفيف. 5 طريقة الحفظ باستخدام مادة السائل الزجاجي )Casting) الطريقة 1 يتم اختيار القالب المناسب للعينة المراد حفظها. 2 يخلط مقدار مناسب من المادة )Casting) مع 5 11 نقط من المادة المرافقة له في كاس زجاجي. 3 تمزج المادتين بحركة بطي ة في اتجاه واحد حتى ال تظهر فقاعات. 4 توضع الكمية في القالب وتترك حتى يقارب التجميد ثم توضع العينة وتضغط بأداة حتى ال ترتفع. 5 تترك حتى تجمد لمدة ) 2131 (دقيقة تقريبا. 6 تعملكمية أخرى للطبقة الثانية مع زيادةكمية المادة )21 25 نقطة ) وتصب على القالب وتترك حتى تجف لمدة 24 ساعة أو أكثر ثم تخرج من القالب. 6 باستخدام مادة glass) (Liquid الطريقة : يخلط كمية متساوية في وعاء من المادتين وتمزج بحركة بطي ة في اتجاه واحدة حتى 131

133 ال تظهر أي فقاعات هواء لمدة )5 11( د. توضع طبقة على العينة النباتية من جهة ثم تترك لتجف ويخلطكمية أخرى وتصب على النبتة من الجهة األخرى وتترك لتجف حتى تجف المادة تحتاج )21( دقيقة تقريبا. 7 باستخدام مادة ( Finish )High Gloss : مادة تدهن بها العينة ثم تترك لتجف وتحافظ على الشكل تحضير السائل ) العبوة األولى هي مادة صمغية تسمى ( resin العبوة الثانية هي مادة التصليب وتسمى ( hardener ) يخلط العبوتان بكميات متساوية في وعاء ويمزج المادتين بحركة بطي ة في اتجاه الزجاجي : واحدة لمدة دقيقتين. تترك حتى تجمد لمدة )3121( دقيقة تقريبا بالحفظ الجاف للنباتات الغير مسطحة: مثل ( النباتات الكاملة ت 1 وضع األزهار على طاولة ثم تقطع سيقانها بحيث 1 طريقة التجفيف تكونكلها بالطول نفسه. بتعليق الزهور األزهار( 2 ترتب األزهار في باقة بحيث تكون الزهور متباعدة عن بعضها و تكون السيقان متقاربة ثم تربط الباقة بسلك مطاطي بشدة. 3 تعلق األزهار مقلوبةكما بالصورة في مكان دافئ وجاف ومظلم لمدة أسبوعين تقريبا. 4 يقص الخيط المطاطي وتنسق األزهار في الزهرية. 132

134 وهو وضع الزهور فيكيس وإغالقه بإحكام والتأكد من سحب الهواء جدا من الكيس..حيث ستقوم الرطوبة المتواجدة في الورود بعملها في التجفيف... ويوضع في مكان جاف.. ويفضل أن يوضع بداخله بعض مسحوق )بودرة التلك) ألنه يقوم بامتصاى الرطوبة. 1 إزالة األوراق من ساق الزهرة تماما و بعدها يتم قطع أسفل الساق بمسافة )5( سم تقريبا. 2 يحضر محلول من الجليسرين بإضافة )%41( جليسرين إلى )615( ماء 2 التجفيف عن طريق الرطوبة: 3 طريقة تجفيف 4 الزهور بواسطة الجلسرين: طريقة تجفيف الزهور بمادة البوراكس ووضعهما في إناء يشبه شكل الفازة العادية. 3 بعد تنظيف الزهور توضع في محلول الجليسرين لمدة )116 ) أيام في مكان بارد و مظلم. 4 يجب إزالة الزهور من المحلول إذا بدأت تظهر حبيبات الجليسرين في األجزاء العليا. 1 نضع قليل من مادة البوراكس المخلوط بالدقيق األبيض أو الرمل الناعم في قاع صندوق الحفظ. 2 نثبت العينة في المادة المستخدمة بحيث تتوسط فرا صندوق الحفظ. )Borax) 3 نتأكد من دخول المادة المستخدمة بين بتالت األزهار. 4 نغطي العينة تماما بالمادة المستخدمة بالحفظ. 5 تترك العينة لتجف ثم نزيح الرمل من العينة. 6 نلون العينة بألوان الورنيش الخاصة باألزهار. مالحظة: وهذه الطريقة تساعد على حفظ الزهور األقل صالبة.. ويجب عدم إبقاء الزهور في المزيج لفترة طويلة فتكفي مدة )11( أيام إذا دفنت في الدقيق األبيض و )16( يوما إذا دفنت في الرمل. 133

135 يمكن استخدام السليكا ألنه أكثر فعالية وسرعة في عملية التجفيف. 1 تؤخذ الزهرة ويوضع قليل من المادة في إناء وتوضع فوقه األزهار النباتية ثم يصب عليهاكمية المادة 2 نتأكد من دخول حبيبات السليكا بين البتالت وتترك من )75( أيام 3 لتسريع عملية التجفيف تدخل الميكروويف لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة متوسطة. هو نوع من الرمل الناعم الملمس ال يجرح الزهور وال يسبب أي خدوش فيها ولدية قدرة عالية على امتصاى الماء وحفظ لون الزهور الطبيعية طريقة االستخدام : 5 طريقة التجفيف باستخدام جدل السيليكا )Silica Gel( 6 استعمال رمل أوليتيك )Oolitic Sand( ( نفس الطريقة المستخدمة في جل السيلكون ) جددد )البذور والثمار( 1 توضع البذور أو الثمار في صينية مغطاة بورق نشاف وتترك معرضة للهواء. 2 تقلب بين وقت وآخر حتى تجف مع استبدال الورق النشاف إن لزم األمر. 3 تلمع بعد جفافها بالورنيش وتعرض بطريقة مناسبة. 134

136 ثانيا : حفظ العينات النباتية في محاليل تحفددددظ العينددددات النباتيددددة عددددادة فددددي محلددددول الفورمددددالين تركيددددز )4 %5( أو فددددي محلددددول مددددن الكحددددول بتركيز) %71 ) وهناك محاليل أخرى تستخدم لحفظ النبات نذكر منها: 1 المحلول الخاى في حفظ النباتات الخضراء : تحفظ في محلول يحضر بالنسب التالية )محلول بليدس(: من الماء المقطر وبعد تمام يضاف اإلذابة )2 1( جمكبريتات النحاس تذاب في )53( سم 3 )5( سددم 3 مددن حددامض الخليددك الثلجددي و) 5 ( سددم 3 مددن محلددول )%41 ) فورمالدهيددد و )51( سددم 3 مددن الكحددول االيثيلدددي تركيددز )%96( ويتددرك المحلدددول مددددةكافيدددة )24 سددداعة تقريبدددا( فدددإذا حددددث ترسددديب يرشدددح ويحتدداج الحفددظ التددام للنباتددات إلددى بقائهددا فددي هددذا المحلددول حددوالي عشددرة أيددام وإلزالددة رائحدة الفورمددالين تغسددل العيندة جيددا بالمداء ثدم تتدرك فدي محلدول مخفدف مدن النشدادر مددة يدوم علدى األقدل قبدل اسدتخدامها, ويمتداز هدذا المحلول بالمحافظة على بقاء اللون األخضر لألنسجة النباتية. 2 المحلول الخاى لحفظ عينات الفواكه الملونة : تحفظ في محلول يحضر بالنسب التالية : )51( جم 3 منكلوريد الزنك تذاب في لتر ماء مقطر بالغليان يرشح ويبرد. يضاف )25( سم 3 من الفورمالدهيد )41 %( و) 25 ( سم 3 جلسرين. يترك المحلول ليرسب وقتكافي فإذا حدث ترسيب يروق ويستخدم للحفظ. 3 المحلول الخاى لحفظ عينات السيقان والجذور لمعمل القطاعات ( محلول مثبت ) : تحفظ في محلول يحضر بالنسب التالية : ) 51 (سم 3 كحول ايثيلي ( )%96 )5( سم 3 حامض خليك ثلجي. )11( سم 3 فورمالدهيد )%41(. )35( سم 3 ماء مقطر. 135

137 4 حفظ عينات الطحالب الكبيرة : توضع العينة في محلول يتكون من )%51( ( حمض الخليك وفورمالدهيد 1:1( لمدة )24( ساعة تعوم العينة في ماء معقم في حوض واسع حتى يمكن فردها. يستعان بلوم من الورق القوى المقوى المصقول ويددفع بالورقدة تحدت العيندة ثدم ترفدع حتدى تحمدل علدى اللوحة وهي مفروده ثم ترفع من الماء. تترك الورقة لتجف في تيار من الهواء. يستخدم ورق سلوفان مساوي لمساحة اللوحة وتفرد على العينة فردا جيدا ويضدغط عيهدا قلديال, تدرى هدذه اللوحدات بحيدث يكدون بينهدا ورق يتشدرب المداء وتضدغط فدي مكدبس أو تحدت اثقدال ويغيدر الدورق المتشرب للماء على فترات حتى تجف العينة تماما وتحفظ اللوحة بعد وضع بطاقة البيانات عليها. مالحظة : تغسدل العيندة المدراد حفظهدا )النباتدات الخضدراء عيندات الفواكده عيندات السديقان ) بالمداء الجداري غسال جيدا إلزالةكل ما على السطح من أتربة. تحفظ في أواني زجاجية محكمة اإلغالق. إظهار التعرق في األوراق النباتية : يتم اختيار األوراق النباتية ذات التعرقات الكبيرة و الخالية من العيوب. تغسل األوراق الخضراء بالماء إلزالة ما عليها من غبار. تسددخن األوراق مددع محلددول )هيدروكسدديد الصددودي وم( حتددى يتحددول لونها إلى الداكن )31 دقيقة تقريبا (. تغسل األوراق بالماء الجاري إلزالة هيدروكسيد الصوديوم. تزال الطبقات الخلوية بواسطة فرشاة ناعمة تحت الماء الجاري. تغسل األوراق جيدا بالماء للتخلص من الطبقات. تغسل األوراق في ماء األوكسجين إلزالة اللون الداكن. تلوين األوراق باستخدام صبغات الطعام لتوضيح التعرق الشبكي

138 حفظ العينات الحيوانية : 1 الحفظ الجاف: طرق تجفيف الحشرات : الطريقة األولى : طريقة التصبير : 1 يتم تخدير الحشرة وذلك بوضعها فدي إنداء بده قطندة مبللدة بدالكلوروفورم ويغلدق اإلنداء بإحكدام وتتدرك لمدة ربع ساعة تقريبا للتأكد من موت الحشرة. 2 يددتم عمدددل صددندوق خشدددبي لددده غطدداء شدددفاف ثددم تثبددت قطعدددة مددن الفلدددين داخددل قاعددددة الصدددندوق الخشبي. 3 يتم غرس الدبوس في وسط صدر الحشرة مع مراعاة فرد أجنحتهدا وأرجلهدا وقرندي استشدعارها حتدى تجف ثم يثبت في قطعة الفلين ثم تثبت أرجل وأجنحة الحشرة بالدبابيس أيضا. 4 توضع قطع من النفتالين داخل الصندوق ويوضع الصندوق في مكان جيد التهوية. 5 يدون تحتكل حشرة اسمها حسب التصنيف العلمي ومكان الجمع وتاريح الجمع. 6 إذاكانت الحشرة صغيرةكالذباب يمكن تثبيتها بمادة الصقة شفافة فوق قطعة الفلين. فوائد الصندوق الخشبي : المحافظة على الحشرات من الهواء لمنع تكسرها. المحافظة عليها من اآلفات التي تتغذى عليها. سهولة نقلها. منع العبث بالحشرات ولمسها. سهولة عرضها. غطاء الصندوق البد أن يكون شفاف حتى يمكن رؤية الحشرة

139 الطريقة الثانية: طريقة الحفظ باستخدام مادة السائل الزجاجي )Casting) يتم اختيار القالب المناسب للعينة المراد حفظها. الطبقددة األولددى : يوضددع مقدددار مددن المددادة )25( ملددم ويضدداف إليهددا خمسددة نقدداط مددن (Castin) القطارة المرافقة. تمزج المادة بحركة بطي ة في اتجاه واحد حتى ال تظهر فقاعات. يوضع الكمية في القالب وتترك حتى يقارب إلى التجميد ثم توضدع العيندة وتضدغط بأداة حتى ال ترتفع. تترك حتى تجمد لمدة )2131( دقيقة تقريبا. تعمدلكميدة أخدرى للطبقدة الثانيدة مدع زيدادةكميدة المدادة ) 15 نقطدة + 31 ملدم مدن المحلول( وتصب على القالب وتترك حتى تجف لمدة 24 ساعة أو أكثر ثم تخرج من القالب مالحظة : ويمكدن الحفدظ باسدتخدام المدادتين Finish High Gloss و Liquid glass والتدي سدبق تحضيرها في حفظ العينات النباتية 138

140 تحنيط الطيور أدوات التحنيط: خطوات العمل : 1 ضع الطائر على لوح التشريح مراعيا أن تكون الجهة البطنية إلى األعلى وضع قطعة من القطن في الفم لمنع سقوط أي سائل 2 خذ أطوال الطائر ( الرقبة, الصدر, األرجل, العجز( 3 باعد بين الريش في المنطقة الصدرية واعمل شق طولي من منتصف الصدر إلى بداية البطن. 139

141 4 يفصل عظم الفخذ من الساق عند الركبة ويخلع عظم العضد من المفصل الكتفي. 5 امسك الجلد عند الحافة المقطوعة وابدأ بنزع الجلد نزعا لطيفا خاليا من أي أثر للحم بواسطة أصابع اليد والمشارط والمالقط استخدم البوراكس أو الملح العادي وذلك برشه بين الجلد واللحم ليسهل فصل الجلد عن اللحم والعضالت وكذلك لتجفيف الجلد وتعقيمه. 6 ادفع الرجل إلى الداخل لتظهر الركبة ثم اقطعها بواسطة القطاعة ثم افصل الجلد حتى يظهركل من الفخذ والساق 1. فصل الجلد حتى يظهركل من الفخذ والساق 2. : استخراج األحشاء يفصل عظم الساق عن الفخذ بواسطة المقص 1 يفصل عظم الساق عن الفخذ بواسطة المقص 2 140

142 7 تابع عملية فصل الجلد باتجاه الناحية الصدرية,وعند الوصول إلى مؤخرة الجناح اقطعه عن الجسم 8 افصل الجلد عن الرقبة بدفعها إلى الداخل,واسحبها حتى تصل إلى مكان اتصال العمود الفقري بالجمجمة,ثم قص الرقبة من عند قاعدة المنقار. )األحشاء كاملة بعد استخراجها( 9 نظف الجمجمة من محتواها من خالل فتحة اتصال الجمجمة بفقرات العمود الفقري باستخدام إبرة التشريح والملقط. 11 افصل الجفون من األجزاء الالصقة بها. 11 افصل األذن من الداخل, وانزع العينين بالملقط وقص اللسان ونظف األرجل والجناحين. 141

143 12 استخدم ملح البوراكس إلزالة وتجفيف بقايا الدهن أو اللحم عن الجلد وفي مكان العينين وداخل الجمجمة. بعد االنتهاء من عملية سلح الجلد,ابدأ بعملية صنع جسم صناعي للطائر بالطريقة اآلتية : أ حضر جسم صناعي من القطن بحيث يمأل تجويف بطن الطائر ومنطقة الرقبة واضغطه بشكل جيد ب أحضر سلك معدني ولف األسالك لعمل التشبيكه. شكل الشبكة ( الشبكية ) الداخلية للطائر إدخال الجزء الخاى بالرأس من الشبكة. ج أدخل السلك في طرف الجمجمة والطرف اآلخر في الذيل. د ادخل الجزء الخاى باألرجل حتى يظهر بين أصابع القدم,وادخلكذلك السلك في تجويف النجاح حتى يصل إلى مقدمة ما تبقى من عظم. 142

144 هد امآل ما تبقى من تجويف البطن حتى يأخذ الطائر شكله وحجمه الطبيعي. مع ضرورة وضع بعض حبات من النفتالين في جوفه لمنع الرطوبة والتعفن. و خيط شق البطن بشكل جيد بحيث ال تظهر آثار الخياطة. ز ضع العيون الصناعية ( حبات من الخرز بالحجم المناسب ) ح احقن ما تبقى من لحم في جسم الطائر, وخصوصا الجنحة واألرجل,بالفورمالين للحفاظ عليها من التعفن. ط ثبت الطائر على القواعد الخشبية بواسطة األسالك الموجودة في األرجل وضعه في مكان بعيد عن الرطوبة والحشرات. 143

145 تحنيط وحفظ الثدييات) األرندب ) األدوات المستخدمة : أدوات تشريح, قواعد خشبية, ناقوس زجاج, ألياف)كتان قطن قش(, إبرة خياطة, عيون إصطناعية, أسالك, قفازات, كمامات, كلوروفورم, فورمالين, بوراكس. خطوات العمل : 1 يتم تخدير األرنب المراد تحنيطه وذلك بوضعه تحت ناقوس زجاجي ثم توضع قطعة من القطن مملوءة بمادة الكلوروفورم داخل الناقوس ويترك لمدة ربع ساعة تقريبا حتى يتم التأكد من موته. 2 يوضع الحيوان على خشبة التشريح على أن تكون الجهة البطنية إلى األعلى ويشق الجلد بواسطة مقص في الخط الوسطى من النهاية البطنية للحيوان من مستوى اتصال األرجل بالجسم حتى بداية فتحة الشرج. 3 باالستعانة باألصابع و المشرط يفصل الجلد عن الجسم ويمكن رش مسحوق البوراكس للمساعدة على فصل الجلد عن الجسم. 144

146 4 نتابع عملية السلح حتى تظهركل من الفخذين والساقين. 5 تقص عظام األرجل ( الساق و األصابع ) مع الجلد, ثم يفصل جلد الذيل عن فقراته والفخذين والساقين ويقطع اللحم وتترك نهايات ذلك بسحب هذه الفقرات تحت الجلد. 6 يقطعكل طرف أمامي عن الكوع و يقص عنق الحيوان من مكان اتصاله بالجمجمة, وينزع الجسم جميعه من داخل الجلد وهكذا يبقى فقط الجلد مع جزء من األرجل واألطراف األمامية. 7 يتم إزالة عيني الحيوان. 8 تنظف الجمجمة من الدما بواسطة سلك وكذلك ينظف ما بقى من الطرفين الخلفيين واألماميين و يزال اللحم العالق بها. 145

147 9 يفرك الجلد بمسحوق البوراكس لتجفيفه وتعقيمه. 11 ثم نتابع عملية حشوكامل الجسم بواسطة الكتان أو القطن و يخاط الجلد بخيط تم دهنه بطبقة رقيقة من الشمع ويجب أن تكون مسافات الغرز وسطا ال متقاربة وال متباعدة. 11 يثبت الحيوان على لوح خشبي بواسطة األسالك الموجودة في رحليه وأطرافه األمامية ويوضع طابعا بجانب الحيوان و يكتب عليه اسمه و تاريح التحنيط. احتياطات هامة: الحذر التام عند استعمال مادة الكلوروفورم المخدرة. عند الحقن يجب مراعاة عدم وجود فطر أو إصابات بالطير وخاصة تمزق الجلد الخارجي. تغلق فتحة فم الكائن عند حقنه بالكلوروفورم وخاصة في رأسه لمنع خروج شيء من العصارة الداخلية للخارج. التأكد من وضع اإلبرة والسائل داخل جسم الكائن المراد تحنيطه عند تفريغ الحقنة. تشغيل مراوح الشفط الموجودة بالمختبر أثناء عملية التحنيط. ارتداء الكمامات والقفازات أثناء عملية التحنيط. 146

148 حفظ الحيوانات القشرية : يوضع الحيوان الميت بالماء المغلي. يفدتح بطدن الحيدوان بالمنشدار أو السدكين الحدادة ويسدتخرج اللحدم ويعقدم الهيكدل مدن الدداخل بوضدعه في فورمالين بنسبة )%5( لعدة دقائق,ثم يجفف وذلك بتركه في مكان متجدد الهواء. يحشى الهيكل من الداخل بمادة الصقة وتلصق األرجل في مكانها إذا انفصلت. يدهن الحيوان بعد جفافه بالورنيش. تحفظ هذه العينة داخل صندوق زجاجي عليه بطاقة تحمل بيانات هذا الحيوان الهيكل العظمي : 1 يندددزع الجلدددد و أكبدددر قددددر ممكدددن مدددن اللحدددم مدددن جسدددم الحيوان الميت. 2 يوضددع هيكددل الحيددوان الميددت فددي المدداء علددى النددار حتددى يغلي و تختلف مدة الغليان حسدب ندوع الهيكدل بحيدث ال تنفصل األجزاء عن بعضها. 3 نضددع الهيكددل فددي المدداء البددارد لمدددة سدداعة أو سدداعتين و نزيددل خاللهددا مددا يكون عالقا من لحم و اربطه بحرى شديد بواسطة الملقط. نضع الهيكل في ماء األكسجين المخفف )%15( لتبييض العظام. 4 5 يترك الهيكل معرضا للهواء و الشمس حتى يسترد لمعانه و يجف تماما. 6 تدربط العظدام مدع بعضدها بمدادة الصدقة أو السدلك,و يجدب عندد ربدط هدذه العظددام مراعدداة الدقددة فددي ترتيبهددا واالسددتعانة بمرجددع علمددي مناسددب يوضددح تركيب الهيكل الذي تم إعداده. يثبت الهيكل على القاعدة الخشبية. يطلى الهيكل بالورنيش أو بطالء األظافر إلعطائه لمعه و للمحافظة عليه. يوضع الهيكل في صندوق زجاجي عليه بطاقة تحمل بيانات عن الهيكل

149 حفظ الديدان : هددي عمليددة نددتخلص فيهددا مددن األحشدداء ثددم أعددادة الجلددد ( الجسددم ) بطريقددة الدددنفح مدددرة أخدددرى إلدددى شدددكله الظددداهري الطبيعدددي و تجفيفددده بتعريضددده لحدددرارة هادئدددة )حمام رملي( فيتصلب بالخطوات التالية : تخرج الدودة المراد تصبيرها من الوعاء المخصص لقتل الديدان. توضع الدودة على أحد جنبيها ممدودة فوق شريحة من الزجاج. يضددغط بقضدديب زجدداجي أو قلددم رصدداى ضددغطا خفيفددا قبيددل مؤخرتهددا وفددي اتجاهها فتخرج بعض أحشائها. تواصدل عمليدة الدتخلص مدن بقيدة األحشداء وذلدك بدأن تنقدل مواقدع الضدغط إلى أجدزاء أخدرى متقاربدة ويجدب أن تدتم العمليدة بخفده حتدى ال يتمدزق جلدد الدودة. يدخل طرف إبرة المنفاخ في مؤخرة الدودة و يضغط قليال فينتفح جلد الدودة. يرفع الجسم بحرى و يعرض تدريجيا لحرارة الحمام الرملي فيالحظ أن الجلد جف و تصلب. ننزع إبرة المنفاخ من مؤخرة الدودة لبدأ خطوات مرحلة العرض و اإلخراج العرض و اإلخراج: نجهز قطعة من السلك الرفيع مساوية لطول اليرقة و تغطى بمادة الصقة. تثبت قطعة من السلك بين أرجل اليرقة فتلتصق بها. يثقب ثقبان دقيقان في الموقع المخصص على قاعدة صندوق العرض يدخل طرفي قطعة السلك في الثقبين ويالحظ أنه ينبغي اختيار أرضية ذات لون مناسدب يؤكدد أبدراز الدودة فوقها. ندون البيانات الالزمة. نغطي صندوق العرض بالغطاء الزجاجي و يمكن تثبيته بالباسبارتوه

150 التحنيط بالسيلكون خواى السيلكون: ال يتددأثر السددليكون بالعوامددل الجويددة, حيددث أندده ال يتمدددد بفعددل الحددرارة أو يددنكمش بفعددل البددرودة, وال يتكسر أو يتشقق. وعامدل تكيدف حركتده )%25( ومددة جفافده الكامدل يتدراوح بدين )21( دقيقدة إلدى )72( سداعة, اعتمدادا على سمكه والجو ويتواجد بألوان متعددة. طريقة االستعمال: تستعمل هذه المادة بواسطة مسدس حقن. التنظيف: يمكن إزالة السليكون الغير جاف بواسطة الماء فقط, أما السليكون المتماسك فيمكن إزالته آليا. احتياطات )الصحة والسالمة(: يجب الحذر من مالمسته للعين أو الجلد, وفي حالة مالمسته للعين فبادر مباشرة بغسل العين بالماء الدافئ. طريقة حفظ الطيور بالسيلكون: عمل شق بطول عظم القفص الصدري. فصل الجثة عن الجمجمة. فصل الجناحين. فصل الساقين تنظيف الجمجمة بإزالة المح والعينين والعضالت. 5 تدعيم الجسم باألسالك ثم خياطة الشق. الحشو بالسليكون مع تركيب العينين

151 طريقة حفظ السحالي الصحراوية بالسيلكون: عمل شق على جانبي الرقبة. قطع الرقبة عند اتصالها بالرأس. سلح الجلد بطريقة القلب ( كالجورب (. تنظيف الجمجمة بإزالة المح والعينين والعضالت. تدعيم الجسم باألسالك ( في السحالي الكبيرة فقط (. خياطة الشق. الحشو بالسليكون وتركيب العينين. التجفيف ثم الدهان بالورنيش. طريقة حفظ األسماك بالسليكون: عمل شق طولي على امتداد البطن. سلح الجلد بإزالة العضالت واألحشاء. قطع العمود الفقري قريبا من الجمجمة. قطع العمود الفقري قريبا من الذيل. تنظيف الرأس بإزالة الخياشيم والمح والعينين. تدعيم الجسم باألسالك. خياطة الشق. الحشو بالسليكون وتركيب العينين ثم التجفيف و الدهان بالورنيش. طريقة حفظ الكركند ( الجراد البحري ) ( اإلستكوزا ) بالسيلكون: 1 إزالة الغطاء الصدري. 2 تنظيف األجزاء الداخلية. 3 تدعيم الجسم باألسالك. 4 الحشو بالسليكون. 5 إعادة تركيب األجزاء. 6 التجفيف ثم الدهان بالورنيش. 150

152 : طريقة حفظ السرطان بالسيلكون: 1 إزالة الغطاء الظهري. 2 تنظيف األجزاء الداخلية. 3 تدعيم الجسم باألسالك. 4 الحشو بالسليكون. 5 التجفيف ثم الدهان بالورنيش. طريقة حفظ الثدييات الصغيرة بالسيلكون 1 عمل شق طولي على امتداد القفص الصدري وينتهي بالقرب من فتحة الشرج. 2 فصل األطراف الخلفية مكان اتصالها بعظام الحوض ثم تنظيفها بإزالة العضالت واألوتار. 3 فصل العمود الفقري عند قاعدة الذيل ثم استخراج العظم من الذيل بالشد. 4 فصل األطراف األمامية مكان اتصالها بعظام الكتف ثم تنظيفها بإزالة العضالت واألوتار. 5 متابعة السلح حتى مؤخرة الرقبة ثم قطع غضاريف األذنين. 6 فصل العمود الفقري مكان اتصاله بالجمجمة. 7 فصل الجفون عن العينين ثم فصل الشفتين. 8 تنظيف الرأس بإزالة المح والعضالت والعينين. 9 التدعيم باألسالك ثم خياطة الشق. 11 الحشو بالسليكون ثم تركيب العينين. طريقة حفظ الضفادع بالسليكون: 1 فتح الفكين وتنظيفهما من العضالت. 2 فصل األطراف األمامية مكان منطقة الحزام الصدري ثم تنظيفها بإزالة العضالت. 3 متابعة السلح حتى تظهر األطراف الخلفية ثم تنظيفها بإزالة العضالت. 4 إزالة ما تبقى من العضالت حول العمود الفقري. 5 التدعيم باألسالك. 6 الحشو بالسليكون ثم تركيب العينين. 7 التجفيف ثم الدهان بالورنيش. 151

153 2 الحفظ الرطب للحيوانات: المحاليل المستخدمة لحفظ الحيوانات : 1 الفورمالين )Formalinc) ويتكون من محلدول غداز فورمالدهايدد مدذاب فدي المداء ويبداع فدي حالتده التجاريدة مركدز ويجدب تخفيفده قبدل استعماله في العينات. وأكثر التركيز استخداما )%5%11( ويمكن الحصول على تركيزات مختلفة حسب الجدول اآلتي: جدول رقم )1( كيفية الحصول على التركيز المطلوب من الفورمالين تركيز المحلول المطلوب %2 %5 %7 كمية المحلول المركز 2 مللتر 5 مللتر 7 مللتر كمية الماء المضاف 98 مللتر 95 مللتر 93 مللتر 91 مللتر 11 مللتر %11 ويستخدم لمنع تحلل الفورمالين وتكون المواد الحامضية التي تغير لون محلول الفورمالين : أ هيكسامين tetaamine) (Hexamethyl حيث تعتبر مادة معادلة ويضاف 311 غم من الهكسامين إلى لتر واحد من الفورمالين المركز. ب األمونيا: للحصددول علددى مددادة فورمددالين معددادل تركيددز )%5( يضدداف )7( مليلتددر مددن األمونيددا إلددى لتددر واحددد مددن الفورمالين المركز ويضاف إلى هذا المزيج )511( مل من الماء المقطر. 152

154 معلومات هامة للحفظ بالفورمالين : 1 استخدام زجاجات خاصة شفافة جدا ومناسبة لحجم العينة. 2 تنظيدف الكدائن الحدي بحفظده فدي قدارورة بهدا فورمدالين قبدل نقلده إلدى قدارورة خاصدة بده لترسديب األوسداخ والقشور أو أي عالق بالكائن. 3 تثبيددت العيندددة علددى لدددوح زجددداجي وربطهددا بأسدددالك شدددفافة أو تثبيتهددا بطريقدددة مناسدددبة تضددمن إظهدددار أهدددم األجزاء, بحيث يسهل إدخال العينة المثبتة على اللوح الزجاجي داخدل أواندي الحفدظ وعرضدها بالطريقدة المناسبة. 4 اسددتخدام أسددالك أو أفددرع األشددجار لتثبيددت بعددض العينددات بالشددكل الطبيعددي ويمكددن أن تلددف األفعددى بطريقة مناسبة على فرع شجرة وتدخل أواني الحفظ. 5 يضدداف بعددض قطددرات مددن محلددول النشددادر حتددى ال يتغيددر اللددون وذلددك ألن العينددة تفددرز حمددض فيددتم معادلتها بقاعدة. 6 ضرورة حقن الحيوان بالفورمالين المركز في األحشاء فذلك يساعد علدى: عدم تعفن أجزاءه الداخلية وخاصة في الحيوانات الكبيرة. 7 يجددب أن تكددون قددارورة حفددظ الكددائن الحددي بالفورمددالين محكمددة اإلغددالق,ألن الفورمددالين يتبخددر فددي درجة حرارة الغرفة العادية ويمكن استخدام البرافين في إغالق العينة. 8 مع طول مدة الحفظ في الفورمالين تتكدون مدادة حمضدية نتيجدة لتحلدل الفورمدالين ويتغيدر لدون المحلدول إلى اللون األصفر وكلما زادة المدة )أكثر من 5 سنوات( يتحول اللون إلى اللون األحمر. ويجدب تغييدر المحلول عند مالحظة التغيير في اللون ألن المادة الحمضية ضارة جدا بالعينات. 9 في حالة حفظ األسماك يضاف للمحلولكبريتات النحاس حتى تعطي اللون األزرق البحري 11 ضرورة وضع المعلومات الالزمة على قارورة الحفظ هدي: )اسم الجامع, مكان الجمع, التاريح الميالدي للجمع, اسم الكائن العلمي وتصنيفه إن أمكن ). 153

155 2 الكحول إذا كانت العينة تحويكمية من الماء ويراد حفظها بالكحول فنتبع الخطوات التالية :. توضع في محلول من الكحول تركيزه )%31( ساعة مدة )24( )24( تنقل إلى محلول تركيزه )%51( مدة ساعة. تنقددل إلددى محلددول مددن الكحددول تركيددزه )%71( علددى أن يضدداف قطددرات مددن الجلسددرين حتددى أنسجة تبقى العينة ناعمة الملمس. ولمنع تبخر سائل الحفظ تغطى حافة غطاء وعداء الحفدظ بشدمع البدرافين أو بشدريط الصدق غيدر منفذ للماء. 3 محلولكارل كحول )171( سم 3 بتركيز )%95( فورمالين (61( سم 3 بتركيز )%41( ماء مقطر )281( سم 3. حمض الخليك الثلجي )21( سم 3. مالحظة : يضاف حمض الخليك الثلجي إلى محلولكارل قبل لحظه استعماله مباشرة. كما يضاف الجسرين إلى المحلول لحفظ الحشرات ذات األجسدام الصلبة. 4 محلول مسحوق الشب أذب )51( جدم مدن مسدحوق الشدب مدع) 5 12( جدم مدن ملدح الطعدام مدع )6( جدم نتدرات صدوديوم مع )31( جم بوتاسيوم مع )11( جم ثالث أكسديد الدزرنيح فدي )111( سدم 3 مدن المداء المغلدي ثدم يرشدح المحلول ويضاف إلى الرشيح )411( سم 3 جلسرين و) 111 (سم 3 من الكحول )%95( 5 محلول حفظ لون األسماك ) 12 (سم 3 فورمالين + ) 61 (سم 3 ماء + ) 8 (سم 3 جلسرين + )21( سم 3 فينول )%1( 154

156 حفظ الكائنات يف احملاليل )السوائل( اسم الحيوان البرمائيات األسماك المحار الحشرات اإلسكارس الديدان الشريطية دودة األرض إسفنج الماء العذب الهيدرا بالنيريا المياه العذبة الدوارات ( العجليات ) البرايوزوا العلق سرطان الماء القراد أم أربعة وأربعين واأللفية البزاق الحلزون المائي الثدييات الكبيرة أجنة الثدييات السلمندر الزواحف الطيور الصغيرة أجنحة الطيور الحيوانات الصغيرة المحلول المستخدم للحفظ فورمالين )%8( ويحقن البطن بالفورمالين محلول حفظ لون األسماك أو فورمالين )%5( فورمالين )%8( كحول أو محلول ) 71 %(كارل أو التجفيف فورمالين أوكحول )%5( كحول )%71( أو )%11( فورمالين فورمالين )%51( ) 71 %(كحول ) 71 %(كحول فورمالين )%11( أوكحول )%71( يغسل بالماء ثم يخزن في )%11( فورمالين ) 71 %(كحول فورمالين )%8( كحول ) 71 %(أو فورمالين )%8( كحول )%71( محلولكارل كحول )%71( أو) %8 ( فورمالين فورمالين )%8( فورمالين )%8( ) 51 %(كحول فورمالين )%5( فورمالين )%8( فورمالين )%8( 51 %كحول محلول مسحوق الشب 155

157 المراجع 1 دليل العمل في مختبر األحياء تأليف / جميل نعمان شاهين 2 دليل المختبرات المدرسية ( الجمهورية اليمنية ) وزارة التربية والتعليم 3 دليل األجهزة واألدوات التعليمية في المختبرات المدرسية تأليف / أ. سعيد آل شافع سليمان الزاكان أ. صالح الخليفة أ. عبدالرحمن القلطي أ. عبداهلل العدواني وآخرون 4 التحضيرات المجهرية الضوئية تأليف/ أ.د. حميد احمد الحاج 5 دليل الطالب للدروس العملية في مبادئ علم الحيوان تأليف/ د. فيصل أبو طربوش محمد صالح الدين السعيد 6 ألا ساس العملي للفطريات تأليف/ د. عبداهلل صالح الخليل 7 نماذج من األنشطة العملية إعداد / ابتهاج السليمان 8 دليل المختبرات إعداد / إدارة اإلشراف التربوي بمنطقة الرياض 9 بيوليجية الحيوان العملية تأليف د. احمد حماد الحسيني د. أيميل شنودر دمان 11 أساسيات علم الفطريات د. عبد اهلل ناصر الرحمة 11 كتاب األحياء للطالب ( للصف األول والثاني والثالث ثانوي ) 12 نوبل في األحياء تأليف / نبيل راغب 13 أساسيات علم الحيوان تأليف /جمس و روبورت 14 التقنية النسيجية الخلوية تأليف / د. نوري الطيب د. بشير جرار 15 أساسيات تحضير العينات النباتية تأليف / أ.د عبداهلل الدعيجي عبدالسالم مليجي محمد عبد الفتاح 16 تشريح النبات العملي تأليف / عبداهلل الدعيجي 17 مذكرة شرائح وتشريح إعداد / المعلمات نفالء القحطاني )ث 2( فاطمة الخلف ( ث 58( فنية المختبر إيمان التمامي ( ث 2( 156

158 الفهرس المددددددددددوضددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددوع الصفحة 2 المقدمة 3 الفصل األول : إرشادات األمن والسالمة في مختبر األحياء إرشادات عامة التعامل مع الزجاجيات استخدام المواد الكيميائية االحتياطات عند استخدام المجهر االحتياطات عند اعداد التحضيرات المجهرية االحتياطات عند التشريح االحتياطات عند أخذ العينات االحتياطات عند التعامل مع العينات المحفوظة االحتياطات عند التعامل مع الحيوانات االحتياطات عند التعامل مع النباتات االحتياطات عند إجراء التجارب مع الفطريات والبكتيريا الفصل الثاني : تصنيف وتجهيزات مختبر األحياء 1111 تصنيف أجهزة األحياء إلى مجموعات كيفية تصنيف تجهيزات مختبر األحياء أدوات مختبر األحياء وكيفية حفظها واستخدامها 157

159 المددددددددددوضددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددوع الصفحة 19 الفصل الثالث : أجهزة مختبر األحياء المجهر البسيط المجهر التشريحي المجهر الضوئي المركب المجهر الرقمي آلة القطع الدقيق الميكروتوم الحاضنة الطرد المركزي ( النابذة ) فرن الهواء الساخن الموصدة األوتوكالف الكلينوستات قياس النمو في النبات قياس النتح في النبات التنافذ االنتشار الغشائي تقدير معدل التنفس )جانوج ) قياس ضغط دم اإلنسان تسجيل انقباض العضلة الفصل الرابع : مهارات أساسية للعمل في مختبر األحياء أوال : تحضير الصبغات والمحاليل عملية الصبغ وأهميتها تصنيف األصبا 158

160 المددددددددددوضددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددوع الصفحة تحضير الصبغات جدول يوضح أهم الصبغات المستعملة في الشرائح وأثرها طرق تحضير بعض المحاليل الكاشفة طرق تحضير بعض المحاليل المثبتة التحميل وأوساطه 58 ثانيا : تحضير البي ات الخاصة ببعض الكائنات الدقيقة والحيوانات األولية زراعة البكتيريا المنابت ( أنواعها, كيفية تحضيرها ) دراسة الصفات المزرعية للبكتيريا الطرق المختلفة لزارعة األنواع البكتيرية طرق الحصول على اآلجار ( لزراعة فطر عفن الخبز ) ثالثا : التحضيرات المجهرية تعريفها, أهميتها, أقسام التحضيرات المجهرية طرق التحضيرات المجهرية أنواع التحضيرات المجهرية تحضير الشرائح المجهرية المؤقتة 8675 ( مسحة من الدم البشري, خاليا البصل, الحيوانات األولية, الخميرة, عفن الخبز, النسيج الطالئي العصبي الدهنيالعضلي الضام,االنقسام الميتوزي, الثغور في الورقة,قطاع عرضي جذر ساق ورقة ذي فلقتين,حبوب اللقاح ( الشرائح المستديمة اعداد وتحضير الشرائح المستديمة 159

161 9491 التقنية النسيجية )احتياطات هامة عند تحضير العينات النسيجية ) المددددددددددوضددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددوع بعض المشاكل التي تظهر أثناء تحضير القطاعات النسيجية ومسبباتها تحضير لبعض الشرائح المستديمة الصفحة )عمل شريحة لبطانة الخد, نسيج ضام فجوي,نسيج دهني, تحضير سحبة من الدم, اعداد مقطع في عظم كثيف بواسطة البرد, اعداد مقطع في عظمكثيف بواسطة نزع أمالح الجير, تحميل الحشرات أو أجزاء منها, تحضير القطاعات النباتية جذر ساق ورقة, االنقسام الغير مباشر (. رابعا :التشريح تعريفه,أهدافه قواعد في التشريح أدوات التشريح تشريح لبعض الحيوانات أو أجزاء منها )النقل والجهاز الدوري,الجهاز الهضمي,الجهاز التنفسي,جهاز اإلخراج البولي,الجهاز العصبي, الجهاز األسماك وتركيبها الداخلي,الطيور وتركيبها الداخلي,الجهاز التنفسي في الحبار,الهيكل الصدفة في الحبار,تشريح الضفدع ) تشريح النبات أساسيات الدراسة التشريحية في النبات تشريح األزهار خامسا : حفظ العينات النباتية والحيوانية تعريف العينة,الهدف من حفظ العينات,أنواع العينات حفظ العينات النباتية الحفظ الجاف للعينات النباتية أ حفظ العينات النباتية المسطحة )األوراق واألزهار ) 160

162 المددددددددددوضددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددددوع ب حفظ العينات النباتية الغير مسطحة ( النباتات الكاملة األزهار ) الصفحة البذور والثمار 2 حفظ العينات النباتية في محاليل إظهار التعرق في األوراق النباتية ج 137 حفظ العينات الحيوانية الحفظ الجاف للعينات الحيوانية طرق تجفيف الحشرات تحنيط الطيور تحنيط الثدييات )األرنب ) حفظ الحيوانات القشرية الهيكل العظمي حفظ الديدان التحنيط بالسيلكون الحفظ الرطب للعينات الحيوانية الفورمالين 154 الكحول محلولكارل محلول مسحوق الشب محلول حفظ لون األسماك 155 جدول يوضح المحاليل المستخدمة في حفظ الحيوانات المراجع الفهرس ]] والحمد هلل حمدا يليق بجالل وجهه وعظيم سلطانه [[ 161